[发明专利]PD1/PDL1单抗致免疫性心肌炎模型及制备方法

说明书

本发明提供一种PD1/PDL1单抗致免疫性心肌炎模型的制备方法，包括通过AAV9介导模型心肌组织高表达PDL1，再对心肌组织高表达PDL1的模型应用PD‑1/PD‑L1单抗造模。本发明还提供了该制备方法所制备的动物模型的用途。本发明制备的模型真实模拟应用PD‑1/PD‑L1单抗发生免疫性心肌炎的患者的发病机制和临床经过，模型更接近于临床患者病理生理状态，成模率高并可动态监测。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及PD1/PDL1单抗致免疫性心肌炎模型及制备方法。

背景技术

PD-1/PD-L1单抗是肿瘤免疫治疗史上的里程碑，为新近备受瞩目的免疫检查点抑制剂之一，是肺癌、黑色素瘤等许多恶性肿瘤的一、二线治疗药物，明显延长了患者总生存期和中位无进展生存期，且适应证仍在增加，但是其副作用也逐渐受到关注，其中心肌炎是最为致命的，因其干扰了心脏正常的电机械功能，且心肌再生能力差，发生免疫性损伤后通常修复不良，因此需要高度警惕肿瘤免疫治疗导致的免疫性心肌炎，规定如应用PD-1/PD-L1单抗后发生心肌炎，需要永久性停药，并立即给予大剂量激素及免疫抑制剂治疗，然而预后仍旧很差，一旦发生，死亡率为40％，当与CTLA-4单抗如伊匹木单抗联用时，死亡率可高达67％。据文献报道PD-1/PD-L1单抗单药应用免疫性心肌炎发病率约万分之六，与CTLA-4单抗联用则增至千分之三，但是随着PD-1/PD-L1单抗应用增多，关于免疫性心肌炎的报道逐渐增加，由于我国恶性肿瘤患者基数大，近年来应用PD-1/PD-L1单抗的患者比例迅速增加，因此发生心肌炎的患者数量多，其高致死性已成为我国肿瘤慢病管理的难题。

由于自然状态下患者应用PD-1/PD-L1单抗发生自身免疫性心肌炎概率低，要想研究其机制、早期预警标志物及新的治疗方式有赖于动物模型的成功建立。我们前期的动物试验结果也说明直接给予PD-1/PD-L1单抗造模成功率非常之低。Keynote024、042等多项研究显示肿瘤组织TPS(PDL1表达率)越高，应用PD-1/PD-L1单抗抗肿瘤效果越好。文献中提及心肌组织表达PDL1，是应用PD-1/PD-L1单抗导致免疫性心肌炎的原因之一；采用PDL1Ig基因重组腺病毒为载体，将PDL1Ig基因转入BN大鼠树突状细胞同时输注受体，以Lewis大鼠为受体，行同种肾移植，转染组为实验组，发现PDL1基因修饰的DC(树突状细胞)可显著延长移植肾存活时间。说明如果能够使物种心肌组织高表达PDL1，那么应用PD-1/PD-L1单抗发生免疫性心肌炎的概率也大大提高。

腺相关病毒是微小病毒科家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20～26nm之间，含有大小在4.7～6kb之间的线状单链DNA基因组。它的复制和增殖依赖于辅助病毒的存在。作为一种基因导入系统，AAV病毒(腺相关病毒)载体具有安全性好，免疫原性低，能感染分裂细胞和非分裂细胞，能介导基因的长期稳定表达等优点。其中，AAV9是公认的高效特异性靶向心脏表达的病毒载体血清型。AAV9不仅会感染心肌细胞，也会感染心脏其他细胞,本团队拟用心肌细胞特异性启动子cTNT来启动目的基因表达。

目前PD-1/PD-L1单抗相关的自身免疫性心肌炎多为药物临床试验的安全性评价的报道，或临床个案报道，只有为数甚少的基础和临床研究，且基础研究中采用的动物模型为PD-1/PD-L1敲除小鼠模型或与放疗等联用所导致的小鼠心脏毒性动物模型，与真实世界PD-1/PD-L1单抗所致的免疫性心肌炎发病机制、病理及临床表现有所差别。

发明内容

本发明提供一种PD1/PDL1单抗致免疫性心肌炎模型的制备方法及制备的模型，真实模拟应用PD-1/PD-L1单抗发生免疫性心肌炎的患者的发病机制和临床经过，模型更接近于临床患者病理生理状态，成模率高并可通过心脏磁共振来动态监测心肌病变。

本发明的一个方面，提供一种PD1/PDL1单抗致免疫性心肌炎模型的制备方法，包括通过AAV9介导模型心肌组织高表达PDL1，再对心肌组织高表达PDL1的模型应用PD-1/PD-L1单抗造模。