[发明专利]单个转录因子诱导脂肪间充质干细胞分化为睾丸间质样细胞的方法

权利要求书

1.一种诱导脂肪间充质干细胞分化为睾丸间质样细胞的方法，其特征在于：所述方法是在体外合成转录因子NR5A1的化学修饰性mRNA，即modNR5A1，利用患者自体尿液中提取的外泌体作为递送modNR5A1的天然载体，形成Exo-modNR5A1复合物，然后，将所述Exo-modNR5A1复合物与患者自体组织来源的脂肪间充质干细胞共培养，诱导其分化为具有睾酮分泌功能的睾丸间质样细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：具体步骤如下：

a、从人的离体脂肪组织中分离脂肪间充质干细胞ADMSCs，并传代培养；

b、体外合成modNR5A1：首先利用pTEMPlz质粒构建NR5A1的DNA模板，然后使用2×HiFiHotStart Ready Mix，通过Tail-PCR反应合成Poly T尾的线性DNA模板，检测浓度并调整为100-200 ng/μL；以核苷酸GTP、ATP、5mCTP及Pseudo-UTP为底物，通过HiScribe T7 ARCAmRNA试剂盒介导的体外转录反应合成modNR5A1；

c、尿源性外泌体的提取：收集自体尿液，4℃条件下使用超速离心法分离外泌体；

d、尿源性外泌体加载modNR5A1：通过优化的超声处理，使步骤b合成的modNR5A1加载至步骤c所提取的外泌体，形成Exo-modNR5A1复合物；

e、将步骤d所述的Exo-modNR5A1复合物与步骤a所得的人源ADMSCs于37℃细胞培养箱共培养，诱导分化为具有睾酮分泌功能的睾丸间质样细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述脂肪间充质干细胞提取于人源皮下脂肪组织或内脏周围脂肪组织。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的脂肪间充质干细胞和外泌体均来自于患者自体。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤d中所述优化的超声处理为：500V、3kHz 、5个循环，其中超声波每持续5秒、暂停2秒为1个循环。

6.一种核酸因子mod NR5A1，其能诱导脂肪间充质干细胞分化为睾丸间质样细胞，所述核酸因子是通过体外转录合成的NR5A1基因的mod RNA。

7.一种复合物，包含权利要求6所述的核酸因子mod NR5A1。

8.根据权利要求7所述的复合物，其特征在于：所述复合物为Exo-modNR5A1复合物，所述Exo-modNR5A1复合物是将mod NR5A1加载至尿源性外泌体形成。

9.权利要求6所述的核酸因子mod NR5A1或权利要求7-8任意一种所述的复合物在制备治疗男性性腺功能减退症药物方面的应用。