[发明专利]一种基于磁珠阳选策略分离自然杀伤细胞的方法在审
| 申请号： | 202110527157.X | 申请日： | 2021-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN113151169A | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 向洋 | 申请（专利权）人： | 上海赛笠生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12N13/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200237 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 磁珠阳选 策略 分离 自然 杀伤 细胞 方法 | ||
1.一种基于磁珠阳选策略分离自然杀伤细胞的方法，其特征在于：具体包括以下步骤，
步骤1、使用磁珠分选缓冲液重悬外周血单个核细胞至14ml圆底试管中使其终浓度为1*108cells/mL；
步骤2、每毫升细胞加入100ul CD 14antibody cocktail并混匀孵育10min；
步骤3、涡旋磁珠30s，每毫升细胞加入100ul Rapidspheres并混匀孵育3min；
步骤4、将体积补到10ml并将样本插入磁铁内孵育3min；
步骤5、缓缓拿起磁铁倒出上清，从而实现上清细胞和磁珠的分离，得到上清细胞；
步骤6、使用磁珠分选缓冲液重悬步骤5所得上清细胞至14ml圆底试管中使其终浓度为1*108cells/mL；
步骤7、每毫升细胞加入100ul CD3 antibody cocktail并混匀孵育3min；
步骤8、涡旋磁珠30s，每毫升细胞加入60ul Rapidspheres并混匀孵育3min；
步骤9、.将体积补到10ml并将样本插入磁铁内孵育3min；
步骤10、缓缓拿起磁铁倒出上清，从而得到上清细胞；
步骤11、使用磁珠分选缓冲液重悬步骤10所得上清细胞至14ml圆底试管中使其终浓度为1*108cells/mL；
步骤12、每毫升细胞加入100ul CD56 antibody cocktail并混匀孵育3min；
步骤13、涡旋磁珠30s，每毫升细胞加入100ul Rapidspheres并混匀孵育3min；
步骤14、将体积补到10ml并将样本插入磁铁内孵育3min；
步骤15、缓缓拿起磁铁倒出上清，并用10ml缓冲液重悬磁珠；
步骤16、将步骤14和步骤15重复两次即可获得自然杀伤细胞。
2.根据权利要求1所述的一种基于磁珠阳选策略分离自然杀伤细胞的方法，其特征在于：所述步骤3、步骤8和步骤13中的涡旋速度为3000rpm。
3.根据权利要求1所述的一种基于磁珠阳选策略分离自然杀伤细胞的方法，其特征在于：所述步骤5中倒出上清后，并用10ml缓冲液重悬磁珠，再结合两次磁铁内孵育3min、分离上清和磁珠，即可获得单核细胞。
4.根据权利要求1所述的一种基于磁珠阳选策略分离自然杀伤细胞的方法，其特征在于：所述步骤10中倒出上清后，并用10ml缓冲液重悬磁珠，再结合两次磁铁内孵育3min、分离上清和磁珠，即可获得T淋巴细胞。
5.根据权利要求1所述的一种基于磁珠阳选策略分离自然杀伤细胞的方法，其特征在于：所述步骤1-步骤16须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。
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