[发明专利]基于金属有机骨架的比率荧光探针的制备和在检测1,4-二硫苏糖醇中的应用

说明书

本发明公开了一种基于金属有机骨架的比率荧光探针的制备，是将Cu‑TCPP、ZrCl₄和苯甲酸超声溶解于DMF中，于100~120℃下反应45~50h，过滤，洗涤，丙酮浸泡进行活化，过滤，真空干燥，得到具有过氧化物酶活性的金属有机骨架PCN‑224(Cu)；将PCN‑224(Cu)和2‑氨基对苯二甲酸（PTA‑NH₂）溶于PBS溶液中，室温下自组装反应6~8 h，即得基于金属有机骨架的比率荧光探针PTA‑NH₂@PCN‑224(Cu)。该比率荧光探针可用于对1,4‑二硫苏糖醇（DTT）的识别检测，且具有良好的选择性，操作简单方便且灵敏度高；同时，该比率荧光探针为反向变化双发射比率荧光探针，可以消除环境和人为因素的干扰，减小实验误差，增加实验结论的可靠性。

技术领域

本发明涉及一种基于金属有机骨架的比率荧光探针的制备方法；本发明同时涉及该比率荧光探针在检测1,4-二硫苏糖醇（DTT）中的应用。

背景技术

1,4 -二硫苏糖醇(DTT)是一种非生理合成分子，通常作为还原剂，在生物学、生物医学、生物化学等各个领域发挥着重要作用。一般情况下，低浓度的还原剂(约300 μM)可以作为一种解毒剂来保护细胞和生物。但高浓度的DTT(超过10 mM)会对某些生物分子造成氧化损伤。

DTT被认为是实验室和工业事故中的严重威胁。迄今为止，仅报道了几种用于DTT检测的分析方法，包括液相色谱法，比色测定法以及荧光测定法。其中，荧光分析法由于其工艺简单，灵敏度高，操作方便等优点而被广泛用于检测DTT。但由于复杂的合成过程、低的灵敏度和选择性，荧光方法的应用受到限制。因此，开发新型荧光材料作为DTT分析的探针仍然迫切。且现有荧光分析法多是单发射，因此，有必要开发比率荧光探针减少环境干扰和实验误差。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于金属有机骨架的比率荧光探针的制备方法；

本发明的另一个目的是提供该比率荧光探针在检测1,4-二硫苏糖醇（DTT）中的应用。PTA-NH₂@PCN-224(Cu)比率荧光探针为反向变化的双发射荧光探针，具有针对无环境干扰的自参考能力和高的灵敏度。

一、PTA-NH₂@PCN-224(Cu)比率荧光探针的制备

本发明基于金属有机骨架的比率荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

（1）将5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉与CuCl₂^.2H₂O溶于DMF中，于130~140℃下回流反应4~6 h，离心、洗涤、真空干燥得到Cu-TCPP。其中，所述5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉与CuCl₂^.2H₂O的摩尔比为1:5~1:6。

（2）将Cu-TCPP、ZrCl₄和苯甲酸超声溶解于DMF中，于100~120℃下反应45~50h，过滤，洗涤，丙酮浸泡进行活化，过滤，真空干燥，得到具有过氧化物酶活性的金属有机骨架PCN-224(Cu)。其中，所述Cu-TCPP、ZrCl₄和苯甲酸的质量比为1:1:50~1:2:55。

（3）将PCN-224(Cu)和2-氨基对苯二甲酸溶于PBS溶液中，室温下自组装反应6~8h，即得基于金属有机骨架的比率荧光探针PTA-NH₂@PCN-224(Cu)。其中，所述PCN-224(Cu)和2-氨基对苯二甲酸的质量比为1:1；所述PBS溶液浓度为0.2 M，pH为7。