[发明专利]pSOY19-ZM3载体、其制备方法及应用

说明书

本发明涉及转基因大豆技术领域，公开了pSOY19‑ZM3载体，pSOY19‑ZM3载体由绿色组织特异启动子PGmRCAβ和切除了35S启动子的pSOY19载体连接而成；还公开了载体的制备方法；还公开了载体的应用。本发明的载体利用大豆绿色组织特异启动子来启动抗除草剂基因G10‑EPSPS基因的表达，从而使抗除草剂蛋白在大豆叶片等绿色组织中表达，而在种子中低表达或者零表达，以此减轻公众对转基因大豆安全性的顾虑，提高公众对转基因大豆的接受度，同时也提高了大豆抗除草剂能力，提高了大豆的产量，本发明的应用将为培育高效抗草甘膦且种子中抗草甘膦蛋白降低的转基因农作物开辟一条更直接更有效的道路。

技术领域

本发明涉及转基因大豆技术领域，具体涉及pSOY19-ZM3载体、其制备方法及应用。

背景技术

大豆(GLycine max.Merr.)是重要的油料作物和国民的蛋白质源，在农业生产上意义重大。大豆生长过程中，病虫草害严重影响了大豆的产量与品质，与国外大豆生产相比较，我国大豆生产竞争力很弱，85％以上依赖于进口，是一个被“卡脖子”的问题。因此，急需通过培育优质抗性品系来提高我国大豆的产量及品质，提高大豆生产的国际竞争力。

之前获得的抗除草剂转基因大豆均为组成型表达，即所产生的转基因大豆种子中也有EPSPS蛋白的积累，且积累量较高，这导致公众无法充分认可转基因大豆的食用安全性，因此发明人研发了pSOY19-ZM3载体、其制备方法及应用，在保证高效抗除草剂的条件下降低种子中抗除草剂蛋白含量。

发明内容

基于以上问题，本发明提供pSOY19-ZM3载体、其制备方法及应用，本发明使抗除草剂蛋白在大豆的叶片等绿色组织中表达，而在种子中低表达或者零表达。

为解决以上技术问题，本发明提供了pSOY19-ZM3载体，pSOY19-ZM3载体由绿色组织特异启动子PGmRCAβ和切除了35S启动子的pSOY19载体连接而成。

为解决以上技术问题，本发明还提供了载体的制备方法，包括如下步骤：

S1：对GmRCAβ基因的起始密码子上游2278bp的启动子序列进行PCR扩增，扩增引物如下：

PGmRCAβ-F：

cccgggtaccgagctcGAATTCAGAGTCACAAACCTTTTCAACT，

PGmRCAβ-R：

gagactggtgatGAATTCGGATGATGATGTCTTTGTGTTTG；得扩增的PGmRCAβ片段，备用；

S2：用EcoRI和NcoI双酶切除植物表达载体pSOY19载体中的35S启动子，备用；

S3：将步骤S1中的PGmRCAβ片段与步骤S2中切除了35S的pSOY19载体相连，得pSOY19-ZM3载体。

为解决以上技术问题，本发明还提供了载体在增加大豆抗除草剂能力且降低大豆种子中抗除草剂蛋白含量的产品中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的载体利用大豆绿色组织特异启动子来启动抗除草剂基因G10-EPSPS基因的表达，从而使抗除草剂蛋白在大豆叶片等绿色组织中表达，而在种子中低表达或者零表达，以此减轻公众对转基因大豆安全性的顾虑，提高公众对转基因大豆的接受度，同时也提高了大豆抗除草剂能力，提高了大豆的产量，本发明的应用将为培育高效抗草甘膦且种子中抗草甘膦蛋白降低的转基因农作物开辟一条更直接更有效的道路。

附图说明

图1为本发明的pSOY19-ZM3载体图谱；

图2为本发明的实施例的pSOY19-ZM3转化株系T0代G10-EPSPS基因的PCR鉴定结果图；