[发明专利]一种将脂肪组织制备成纳米囊泡的方法及该纳米囊泡的应用有效

专利信息
申请号: 202110529291.3 申请日: 2021-05-14
公开(公告)号: CN113304111B 公开(公告)日: 2022-05-31
发明(设计)人: 曾宇阳;孙家明;汪振星;陈雳风;孙谛;牟珊 申请(专利权)人: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
主分类号: A61K9/127 分类号: A61K9/127;A61K47/46;A61L27/36;A61L27/50;B82Y5/00;B82Y40/00;A61L27/60
代理公司: 武汉楚天专利事务所 42113 代理人: 杨宣仙
地址: 430022 湖*** 国省代码: 湖北;42
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摘要:
搜索关键词: 一种 脂肪 组织 制备 纳米 方法 应用
【说明书】:

发明提供了一种将脂肪组织制备成纳米囊泡的方法及该纳米囊泡的应用。所述方法具体是将临床获取的新鲜脂肪组织依次经过漂洗、剪碎后装入两个通过螺纹连接器连接的螺口注射器中,在两分钟内快速来回推挤形成均一黄色的悬混液态,转入无菌离心管内离心去掉上层油脂后吹打均匀,然后超声获得乳白色产物,再次离心去除上层油脂后,使用多重过滤膜推挤装置的注射器吸取上述离心后下层的水质层,并挤压过滤得到直径为60~400nm纳米囊泡产物;本发明制备的纳米囊泡具有促进脂肪再生功能,将其与真皮微颗粒混合成组织移植物用于软组织缺损填充,减轻了脂肪中油滴引起的炎症反应,提高了软组织填充后的体积保留率,同时也降低了真皮直接填充的硬度。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域,具体是一种将脂肪组织制备成纳米囊泡的方法及该纳米囊泡的应用。

背景技术

纳米囊泡是一种直径在纳米级别的脂质包膜包裹的囊泡,其内容物可为蛋白质、核酸及药物等物质,起到影响细胞行为和治疗疾病的作用。纳米囊泡从获取方式上可分为细胞自然分泌的细胞外囊泡和人工合成的囊泡两种类型,但是在目前的实际应用中,细胞外囊泡由于细胞分泌而来,存在着获取复杂、产率低等问题;人工囊泡存在价格昂贵等不足。近年来,通过多重过滤膜反复挤压细胞导致细胞膜破裂然后重组为纳米囊泡的方式提高了囊泡产率,但是该技术需要在体外培养扩增细胞,增加了污染风险,并存在致瘤可能。目前还没有将机体组织通过反复机械推挤直接制备成纳米囊泡的报道。

自体脂肪移植是治疗机体软组织缺损的常用方法,但是移植后体积保留率低是目前脂肪移植技术急需解决的难题,影响了脂肪填充的治疗效果。使用自体真皮组织也是一种填充手术方法,真皮具有体积保留率较高的优点,但是不如脂肪组织柔软,同时组织来源也比脂肪少,在临床上填充应用领域有限。

发明内容

本发明针对目前纳米囊泡因产率低、价格高、临床转化慢等原因导致临床应用的不足问题提供了一种将脂肪组织制备成纳米囊泡的方法及该纳米囊泡的应用,该方法制备的纳米囊泡有促进脂肪再生功能,将其与真皮微颗粒混合成组织移植物,可以提高软组织填充时的体积保留率,同时也可以降低真皮直接填充的硬度。

为了达到上述技术目的,本发明提供了一种将脂肪组织制备成纳米囊泡的方法,其特征在于,具体步骤如下:

(1)通过临床手术获取新鲜脂肪组织标本,并用生理盐水漂洗;

(2)将脂肪组织剪碎成小块,装入5~50毫升的螺口注射器中,注射器通过螺纹连接器与另一螺口注射器相连;

(3)在两分钟内快速来回推挤注射器中的脂肪组织,将脂肪推挤成均一黄色的悬混液态,转入无菌离心管内;

(4)使用离心机以2000g±200g的离心力对步骤(3)中的黄色液态悬混物离心5~10分钟,使其离心分层为上部的油脂层和下部的淡黄色颗粒物;

(5)去掉离心分层后上部的油脂层,留取底层淡黄色颗粒状物,并加入1~ 3毫升生理盐水后吹打均匀;

(6)使用无菌超声波发生探头,以40~80瓦功率对淡黄色颗粒状物进行超声3~5分钟,获得乳白色产物;

(7)再次使用离心机以2000g±200g离心力离心乳白色产物5-10分钟,使其离心分层为上部的白色油脂层和下部的水质层,并去除白色油脂层;

(8)使用多重过滤膜推挤装置的注射器吸取上述离心后下层的水质层,然后挤压过滤得到直径为60~400nm纳米囊泡产物。

本发明较优的技术方案:所述步骤(8)中的挤压过滤过程是:组装好多重过滤膜推挤装置,首先使用10微米孔径的过滤膜,来回推挤注射器10次,后将过滤膜更换为孔径5微米的过滤膜,继续来回推挤注射器10次,后将过滤膜更换为孔径1微米的过滤膜来回推挤注射器10次后,静置2小时以上得到纳米囊泡产物。

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