[发明专利]一种王老吉凉茶浓缩汁UPLC指纹图谱的建立方法及其检测方法

权利要求书

1.一种王老吉凉茶浓缩汁UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包含如下步骤：

S1、对照品溶液的配制：分别精密称取对照品丹参素、原儿茶酸、新绿原酸、15-去甲基鸡蛋花苷、绿原酸、裂环马钱苷、咖啡酸、海芒果酸B、mesonolic acid D、异迷迭香酸苷、异绿原酸B、异绿原酸C、迷迭香酸和异绿原酸A，加入30～50％甲醇溶解，配制成0.03～0.06mg/mL的溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

S2、供试品溶液的配制：取王老吉凉茶浓缩汁10～20mL，5000r/min离心15min，取离心后上清液5-10mL，加入15～30mL甲醇稀释沉淀，以5000r/min再次离心，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

S3、高效液相色谱法测定：分别精密吸取步骤S1制得的对照品溶液和步骤S2制得的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的王老吉凉茶浓缩汁指纹图谱；所述超高效液相色谱仪测定条件包括：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；柱温：柱温为25～35℃；流动相：体积浓度为0.08～0.12％的甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B；流速：0.2～0.5mL/min；进样量：1～5μL；检测波长：210～280nm；还包括：按下列洗脱程序进行洗脱：0-6分钟时，流动相B体积百分比由5％上升至7％；6-7分钟时，流动相B体积百分比由7％下降至5％；7-12分钟时，流动相B体积百分比由5％上升至8％；12-15分钟时，流动相B体积百分比由8％上升至13％；15-32分钟时，流动相B体积百分比由13％上升至18％。

2.如权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤S3中所述的共有特征峰为14个，分别为：1号-丹参素，2号-原儿茶酸，3号-新绿原酸，4号-15-去甲基鸡蛋花苷，5号-绿原酸，6号-裂环马钱苷，7号-咖啡酸，8号-海芒果酸B，9号-mesonolic acid D，10号-异迷迭香酸苷，11号-异绿原酸B，12号-异绿原酸A，13号-迷迭香酸，14号-异绿原酸C。

3.如权利要求2所述的建立方法，其特征在于，以9号mesonolic acid D为参照峰，各特征峰的相对保留时间在规定值的±10％之内，各峰的规定值分别为：0.13、0.16、0.21、0.24、0.40、0.47、0.53、0.60、1.00、1.16、1.20、1.25、1.40和1.43。

4.如权利要求2所述的建立方法，其特征在于，以9号mesonolic acid D为参照峰，各特征峰的相对峰面积在规定值的±20％之内，各峰的规定值分别为：0.53、0.13、0.40、0.19、0.46、0.11、0.64、0.32、1.00、0.11、0.24、0.21、0.42和0.19；分别构建得到由上述共有特征峰构成的UPLC指纹图谱。

5.一种王老吉凉茶浓缩汁UPLC指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的配制：分别精密称取对照品丹参素、原儿茶酸、新绿原酸、15-去甲基鸡蛋花苷、绿原酸、裂环马钱苷、咖啡酸、海芒果酸B、mesonolic acid D、异迷迭香酸苷、异绿原酸B、异绿原酸C、迷迭香酸和异绿原酸A，加入30～50％甲醇溶解，配制成0.03～0.06mg/mL的溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

(2)供试品溶液的配制：取王老吉凉茶浓缩汁10～20mL，5000r/min离心15min，取离心后上清液5-10mL，加入15～30mL甲醇稀释沉淀，以5000r/min再次离心，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

(3)高效液相色谱法测定：分别精密吸取步骤S1制得的对照品溶液和步骤S2制得的供试品溶液，按照权利要求1所述色谱条件进行检测，将检测得到的供试品溶液色谱图与权利要求1的建立方法得到的指纹图谱比较，计算相似度，对王老吉凉茶浓缩汁UPLC的质量进行评价。