[发明专利]蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂及其应用

说明书

本发明公开了8种蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂及其在抗血栓形成中的应用。提供了8种分属多种结构类型的蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂及其用途。荧光结合实验及胰岛素还原实验表明8种蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂均能结合在PDI‑b’x结构域而抑制蛋白质二硫键异构酶的活性。取三种黄酮类小分子抑制剂做体内实验，在电刺激诱导的小鼠血栓形成模型中，小分子抑制剂能有效延后小鼠血栓形成时间，表现出好的抗凝效果。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂及其应用。

背景技术

蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase, PDI）是内质网中一类重要的氧化还原酶，主要包含a-b-b’-a’4个类硫氧还蛋白结构域，晶体结构表明PDI的四个结构域呈U型结构排列。其中a与a’结构域是其催化结构域，位于U型的开口处，“CGHC”基序构成其活性中心，负责二硫键的形成，断裂和重排；b与b’ 结构域不具有催化能力，位于U型结构的底部区域，主要负责底物的结合。PDI可以通过自身活性中心氧化还原状态的变化将二硫键引入新生蛋白质；也可以作为分子伴侣帮助蛋白质正确折叠，在维持内质网的稳态中起着重要的作用。PDI在一些情况下还可以分泌到细胞外，调节细胞表面受体的构象二硫键而调节受体蛋白活性，进而调节一系列生理过程。

在血栓形成过程中，PDI会从活化的血小板中分泌出来，调节多种血小板表面整合素受体（如αIIbβ3，GPIbα等）及凝血因子（如血小板因子V，组织因子等）的活性而调节血栓的形成，在血栓形成的过程中起着极其重要的作用。在小鼠实验模型中，PDI抗体的加入明显抑制了小鼠血栓的形成，表明PDI可以作为一个抗血栓形成的药物开发靶点。近年来，高通量筛选及虚拟筛选的应用促进了小分子抑制剂的发展，以PDI为靶点的抗血栓形成抑制剂开发也成为当下的一个热点。本发明通过体外实验筛选出的8 种PDI小分子抑制剂，它们都是通过直接结合PDI的b’x结构域而抑制PDI的活性。这些抑制剂在电刺激诱导的小鼠血栓形成模型中有效的延长了小鼠血栓形成时间，表现出良好的抗凝效果。

发明内容

本发明的目的在于提供了8种靶向蛋白质二硫键异构酶（PDI）的小分子抑制剂及其应用，这8种小分子抑制剂的结构与目前现有的PDI小分子抑制剂结构不同。体外实验表明，这些小分子抑制剂均可不同程度的抑制PDI活性。

一种蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂，所述蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂为化合物2-氨基-3-羟基-N’-（2,3,4-三羟基苄基）丙酰肼盐酸盐、3-羟基-2-苯基-4H-色烯-4-酮、乙酸4-甲酰基-2-甲氧基苯酯、2-羟基-N-苯基苯甲酰胺、3,5,7-三羟基-2-苯基-4H-色烯-4-酮、1-（2,4-二羟基苯基）-3-（4-羟基苯基）丙-2-烯-1-酮、4'-O-(3,4-二甲基三甘醇基苄基)、4'-O-(4-硝基苄基)槲皮素中的一种。上述述8种蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂化合物的结构如下：

上述蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂能直接结合PDI-b’x结构域，抑制蛋白质二硫键异构酶的活性。

上述蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂在抗血栓形成中的应用。

上述蛋白质二硫键异构酶小分子抑制剂在制备抗血栓形成的药物中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明提供了8种小分子抑制剂作为蛋白质二硫键异构酶抑制剂的应用。在分子水平上，这几种小分子抑制剂可以与蛋白质二硫键异构酶的b’x结构域直接相互作用而抑制PDI的活性。Galangin, 4’-O-(3,4-triethyleneglycol)-quercetin及4’-O-(4-nitrobenzyl)-quercetin三种黄酮类小分子在电刺激诱导的小鼠血栓形成模型中，明显延后小鼠血栓形成时间，表现出良好的抗血栓形成效果。

附图说明