[发明专利]一种肌红蛋白抗体-酶标记物及其制备与应用

权利要求书

1.一种肌红蛋白抗体-酶标记物，其特征在于，由马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ和经巯基活化的酶标记物交联得到；

所述马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ由6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯作为交联剂，与肌红蛋白抗体MBⅡ交联制成；其中，6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与肌红蛋白抗体MBⅡ的摩尔比为（10±1）:1；6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与肌红蛋白抗体MBⅡ的交联反应在室温、避光条件下进行2±0.2小时；

所述经巯基活化的酶标记物是以N-琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸盐作为交联剂，与碱性磷酸酶交联后得到巯基修饰的酶标记物然后经盐酸羟胺活化制成；其中，N-琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸盐与碱性磷酸酶的摩尔比为（10±1）:1；N-琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸盐与碱性磷酸酶的交联反应在室温、避光条件下进行2±0.2小时；经盐酸羟胺活化的方法为：向N-琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸盐与碱性磷酸酶交联反应得到的巯基修饰的酶标记物中加入终浓度为100mM的盐酸羟胺缓冲液，得到混合液M，加入体积为所述混合液M的0.1%的TEA，在室温下避光反应1±0.1小时。

2.一种肌红蛋白抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）以6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯为交联剂，与肌红蛋白抗体MBⅡ交联反应后纯化，得到马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ；

（2）以N-琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸盐为交联剂，与碱性磷酸酶交联反应，得到巯基修饰的酶标记物；

（3）使用盐酸羟胺对所述巯基修饰的酶标记物进行巯基活化，得到经巯基活化的酶标记物；

（4）将步骤（3）的经巯基活化的酶标记物与步骤（1）的马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ混合反应后纯化，得到所述的肌红蛋白抗体-酶标记物；

所述步骤（1）中，6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与肌红蛋白抗体MBⅡ的摩尔比为（10±1）:1；

所述步骤（2）中，N-琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸盐与碱性磷酸酶的摩尔比为（10±1）:1；

所述步骤（1）和（2）中，交联反应在室温、避光条件下进行2±0.2小时；

所述步骤（3）中，所述巯基活化的方法为：向所述巯基修饰的酶标记物中加入终浓度为100mM的盐酸羟胺缓冲液，得到混合液M，加入体积为所述混合液M的0.1%的TEA，在室温下避光反应1±0.1小时。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）的反应在室温下避光进行1±0.1小时后过Superdex200柱，使用0.1M、pH=7.5的PBS缓冲液进行洗脱，收集第一峰的液体，得到所述肌红蛋白抗体-酶标记物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，收集第一峰的液体后，使用超滤浓缩管将所得液体浓缩至1~3mL。

5.权利要求1所述肌红蛋白抗体-酶标记物在制备肌红蛋白酶促化学发光免疫检测试剂盒中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒在使用中以所述肌红蛋白抗体-酶标记物为基质，用与所述肌红蛋白抗体-酶标记物进行配套使用的稀释液稀释后，用于肌红蛋白抗原的酶促化学发光检测；

与所述肌红蛋白抗体-酶标记物进行配套使用的稀释液的制备方法为：准备pH=7.5、0.1M的PBS，以体积比计，加入1%的吐温20、0.05%的叠氮钠、0.05%的ProClin300；以重量比计，加入10%的PEG2000、0.5%的酪蛋白钠盐、3%BSA，混合即得。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述基质与稀释液按照体积比为1:（200±100）进行稀释。