[发明专利]一种厌氧微生物的纯培养方法

说明书

本发明公开了一种厌氧微生物的纯培养方法。包括以下步骤：步骤1：配制液体培养液，煮沸，滴加刃天青，分装至细口管中，得到培养管；步骤2：通入N₂/H₂混合气体，曝气，迅速盖紧橡胶塞；步骤3：将培养管置于高压灭菌锅内，高温灭菌；转移至超净台中紫外灭菌；步骤4：使用注射器将磁性抗氧化剂注入至培养管中，混匀；使用注射器将厌氧微生物种子液注入培养管中，放入恒温培养箱中培养，得到厌氧微生物群。有益效果：(1)本发明无需利用厌氧培养箱，操作简单便利；(2)本发明中磁性抗氧化剂不溶于液体培养液，不易被厌氧微生物吸收，不影响生长，且可以通过磁性分离，从而简化厌氧微生物的分离，得到较纯的厌氧微生物群。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体为一种厌氧微生物的纯培养方法。

背景技术

常见的厌氧微生物培养过程中，有发酵方式、多种微生物共培养方式，但都会存在分离问题。而纯培养方式中，一般使用厌氧培养箱或厌氧培养罐来培养厌氧微生物，但该方式操作较复杂，较适合固体培养基培养，不适合液体培养基培养。目前，常见的液体培养基中，会预先加入还原剂如半胱氨酸、抗坏血酸等，来降低氧化还原电位，隔绝氧气，从而形成厌氧环境，进行培养微生物。但是该方法，加入的还原剂量过多，溶解性较大，存在被微生物食用，影响厌氧微生物的生长；同时，该还原剂不易与微生物分离回收，影响最终微生物菌液的纯度，造成培养废液污染。

综上，解决上述问题，制备一种可分离回收的抗氧化剂，用于降低氧化还原电位，形成一种厌氧微生物的纯培养方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种厌氧微生物的纯培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种厌氧微生物的纯培养方法，包括以下步骤：

步骤1：配制液体培养液，水浴加热，滴加NaOH调节pH；煮沸，滴加刃天青，分装至细口管中，得到培养管；

步骤2：将曝气针插入培养管，通入N₂/H₂混合气体，曝气，迅速盖紧橡胶塞；

步骤3：将培养管置于高压灭菌锅内，高温灭菌；冷却，放入恒温培养箱中；转移至超净台中紫外灭菌；

步骤4：使用注射器将磁性抗氧化剂注入至培养管中，混匀；使用注射器将厌氧微生物种子液注入培养管中，放入恒温培养箱中培养，得到厌氧微生物群。

较为优化地，所述厌氧微生物为产乙酸嗜蛋白菌时，步骤1中，每升液体培养液中包括以下成分：5g多聚蛋白胨、5g胰蛋白胨、10g酵母浸膏、10g葡萄糖、0.96L蒸馏水、40mL微量元素原液；每升微量元素原液中包括以下成分：0.2g CaCl₂、0.4g MgSO₄·7H₂O、1.0gK₂HPO₄、1.0g KH₂PO₄、10.0g NaHCO₃、2.0g NaCl、1L蒸馏水。