[发明专利]一种草果酚酸含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种草果酚酸含量的测定方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体包括如下步骤：1)供试品溶液制备；2)对照品溶液制备；3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，采用外标法测定含量。本发明草果酚酸含量的测定方法，可以用于草果中原儿茶酚酸和香草酸的含量检测，填补了草果中酚酸的质量检测的空白，完善了草果的质控体系，且方法操作简单，精密度高，稳定性好，重复性好，准确度高，易于推广应用。

技术领域

本发明涉及一种草果酚酸含量的测定方法。

背景技术

草果又名草果仁、草果子、老寇，始载于《宝庆本草折中》，为姜科豆蔻属植物多年常绿丛生草本植物草果Amomum tsaoko Crevost et Lemaire的干燥成熟果实，主产于广西、云南、四川、贵州等地。其气香浓，性辛温，归脾经和胃经，中国药典(2020版)称其“具有燥湿温中、截疟除痰的功效，用于寒湿内阻、痞满呕吐、疟疾寒热、瘟疫发热等症”。此外，草果亦作为调味香料用于食品行业。草果主含有挥发油、黄酮、酚酸、甾体、萜类及二苯庚烷类等化学成分。

目前国内外学者主要集中于草果挥发油的研究。草果酚酸作为一个重要的有效成分群，目前仅有少量的研究报道，如李志君等采用LC-MS/MS定性分析发现，草果中主要含有原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸等10种多酚物质，王暐等从草果果实中纯化制备得到了9个酚性成分，尚未见草果酚酸提取与具体酚酸指标成分定量测定标准的研究报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种草果酚酸含量的测定方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体包括如下步骤：

1)供试品溶液制备：取草果粉碎过筛，加乙醇提取，过滤，取滤液蒸干，加氨水溶解，再过滤，滤液调pH值2～3，再加乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液蒸干，加甲醇溶解，即得供试品溶液；

2)对照品溶液制备：分别取原儿茶酚酸和香草酸对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；

3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，采用外标法测定含量；色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：体积比13：87的甲醇-0.1％磷酸溶液。

进一步地，步骤1)所述过筛为过2号筛；所述提取为回流提取，回流提取的温度60～90℃，次数2～3次，每次乙醇的加入量为草果的2～10倍量v/w，ml/g，每次提取时间1.5～3.5h。

更进一步地，所述回流提取的温度85℃，次数2次，每次乙醇的加入量为草果的4倍量v/w，ml/g，每次提取时间2.5h。

更进一步地，所述乙醇为浓度65％的乙醇。

进一步地，步骤1)所述氨水的加入量为草果的2倍量v/w，ml/g；所述调pH值的试剂为盐酸；所述蒸干的温度为40～80℃，优选60℃。

进一步地，步骤1)所述萃取是加乙酸乙酯萃取2～3次，每次乙酸乙酯的加入量为氨水的2～4倍量v/v，ml/ml，优选加乙酸乙酯萃取2次，每次乙酸乙酯的加入量为氨水的3倍量v/v，ml/ml；所述甲醇的加入量为乙酸乙酯萃取液蒸干固体的1～5倍量v/w，ml/mg，优选2.5倍量v/w，ml/mg。进一步地，步骤2)所述对照品溶液每1mL含原儿茶酚酸0.5～2.5mg，香草酸0.5～2.5mg，优选对照品溶液每1mL含原儿茶酚酸0.8mg，香草酸0.8mg。

进一步地，步骤3)所述色谱条件中色谱柱Eclipse Plus C₁₈，规格为150mm×3.0mm，2.7μm。

进一步地，所述色谱条件中流速0.5～1.5mL/min；柱温20～40℃；检测波长262～282nm；进样量5～20μL。

更进一步地，所述流速1mL/min；柱温40℃；检测波长272nm；进样量10μL。