[发明专利]一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及检测试剂技术领域，特别是涉及一种抗肝素稳定的α‑L‑岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用。本发明所述试剂盒包括硫酸链霉素0.03~0.1g/L、缓冲液50~500mmol/L、底物0.1~3g/L、表面活性剂1~50g/L、稳定剂0.001~0.1g/L和防腐剂0.3~3g/L；所述底物包括2‑氯‑对硝基苯酚‑α‑L‑岩藻糖苷或M‑G‑2‑氯‑对硝基苯酚‑α‑L‑岩藻糖苷。本发明通过在α‑L‑岩藻糖苷酶检测试剂中添加适宜浓度的硫酸链霉素，有效去除了样本中肝素的干扰，解决了AFU单试剂不抗肝素的问题。

技术领域

本发明涉及检测试剂技术领域，特别是涉及一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用。

背景技术

α-L-岩藻糖苷酶（AFU）是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人体内的各种组织、细胞和体液中，尤其以肝、肾等组织活性较高。AFU在诊断肝细胞癌中敏感性好，阳性率高，是AFP阳性率的三倍以上，对AFP阴性病例及小细胞肝癌的诊断价值极大，是早期原发性肝癌诊断的有用指标。

目前检测AFU的方法主要有荧光法、终点比色法、速率法。荧光法是利用岩藻糖苷酶化合物在岩藻糖苷酶水解后，释放出可发射荧光的4-甲基伞形酮，通过检查荧光强度来分析酶活力。该方法对仪器要求高，还需要凝胶过滤去除干扰物质，不能用于自动化分析，难以进行普及推广。终点比色法是以PNP-AFU为底物，底物被酶分解后产生色团，该色团在碱性条件下呈现黄色，利用分光光度法进行定量分析。该方法操作简便，对于设备要求也不高，但是酶本身的抗干扰性差，不能解决血清溶血、脂血等因素对测定的影响。主要测定操作繁琐，所需反应的时间也较长，不能自动化检测所以难以推广。速率法是以AFU在合适的反应条件下催化含呈色基团的特定底物水解，在一定的波长下使吸光度增加，连续监测吸光度值的变化可以计算出样本中AFU的活性。该方法操作简单，测定时间短，灵敏度和抗干扰性都有提高，适用于各种半/全自动分析仪器，便于普及推广。由于速率法具有便于临床推广应用的特点，近年来AFU检测逐步在临床医学方面得到普遍应用。

然而，样本经抗凝剂肝素处理后，肝素会使α-L-岩藻糖苷酶单试剂发生浑浊，导致吸光度假性偏高，从而使检测结果偏高，阴阳性不符。因此，亟需一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测单试剂。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒有效去除了肝素的干扰，解决了AFU单试剂不抗肝素的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒，所述试剂盒包括硫酸链霉素0.03~0.1g/L、缓冲液50~500mmol/L、底物0.1~3g/L、表面活性剂1~50g/L、稳定剂0.001~0.1g/L和防腐剂0.3~3g/L；所述底物包括2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷或M-G-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷。

优选的，所述稳定剂包括L-半胱氨酸。

优选的，所述试剂盒包括硫酸链霉素0.05~0.1g/L、缓冲液250~300mmol/L、底物1g/L、表面活性剂30g/L、L-半胱氨酸0.03~0.1g/L和防腐剂1~2g/L；所述底物包括2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷或M-G-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷。

优选的，所述试剂盒包括硫酸链霉素0.05g/L、缓冲液300mmol/L、底物1g/L、表面活性剂30g/L、L-半胱氨酸0.05g/L和防腐剂2g/L；所述底物包括2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷或M-G-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷

优选的，所述缓冲液包括柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液或Good's缓冲液；所述缓冲液的pH值为4.5~5.5。

优选的，所述表面活性剂包括曲拉通100、Brij35和吐温-20中的一种或多种。