[发明专利]一种非诊断目的基于纳米复合材料的LAPS传感器检测GPC3方法

权利要求书

1.一种非诊断目的基于纳米复合材料的LAPS传感器检测GPC3的方法，其特征在于，按以下步骤进行：

步骤一：血红素/还原型氧化石墨烯/铂@钯纳米材料H-rGO-Pt@Pd NPs的制备

（1）称取30mg氧化石墨烯GO，加入30mL超纯水，超声破碎；然后加入10 mg 抗坏血酸AA，搅拌12h，得到还原型氧化石墨烯rGO；

（2）将30mg 固体血红素Hemin溶解于10μL氨水，加入30mL超纯水；将Hemin溶液和rGO溶液混合，然后加入8μL水合肼溶液，涡旋10min；将混合溶液在60℃水浴4h，然后以12000 r/min离心 10min，去掉上清液，洗涤、烘干，得到血红素/还原型氧化石墨烯H-rGO复合纳米材料；

（3） 将2mL 0.2% 的邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯PDDA溶液和5mL 0.2mol/L的NaCl溶液加入到10mL 0.5mg/mL的H-rGO溶液中，搅拌反应12h，离心、清洗，得到PDDA修饰的H-rGO溶液；将2mL 20 mmol/L的Na₂PtCl₆溶液和2mL 20 mmol/L的Na₂PdCl₄溶液加入到PDDA修饰的0.5 mg/mL的H-rGO溶液中，搅拌反应12h；然后向溶液中加入10mL 乙二醇EG溶液进行混合，用1mol/L 的NaOH溶液调节混合溶液的pH值到12，140℃回流反应4h；离心、清洗，得到H-rGO-Pt@Pd NPs复合纳米材料；

步骤二：LAPS敏感单元的构建

（1）将LAPS芯片放置乙醇溶液中洗涤10min，放置在丙酮溶液中超声洗涤10min，再放置超纯水中超声洗涤10min，吹干；

（2）将预处理后的芯片表面滴加6μL 1.0 mol/L 的NaOH溶液，30min后用纯水清洗；然后滴加6μL质量分数为1%的氨基硅烷化试剂APTES溶液，在4°C冰箱放置12-24h，用纯水洗涤三次；然后滴加6 μL质量分数为2.5%戊二醛溶液至芯片表面，偶联30min；

（3）在上述条件下制备的芯片上滴加6μL H-rGO-Pt@Pd NPs溶液，25°C孵育3h，用纯水清洗干净；

（4）在上述芯片上滴加6μL浓度为5.0 μmol/L GPC3Apt溶液，25°C孵育2h后清洗干净，然后滴加6μL质量分数为1%的BSA溶液，30min后清洗，晾干，得到LAPS芯片敏感单元界面；

步骤三：GPC3工作曲线的绘制

（1）在LAPS 芯片敏感单元界面滴加6μL GPC3溶液，25°C孵育1h后取出，制成LAPS传感器；

（2）将上述的LAPS传感器浸入到pH值为6.5、浓度为2.0mol/L的PBS缓冲液里面，在外加偏置电压作用下，由于GPC3Apt与GPC3之间的特异性识别作用引起LAPS敏感单元中的电势之间的变化，使得LAPS传感器的I-V曲线产生相应的偏移，采用LabVIEW平台记录不同GPC3浓度的LAPS传感器的电压偏移量，绘制工作曲线；

步骤四：待测样本中GPC3的检测

（1）在步骤二得到的LAPS 芯片敏感单元滴加6μL待测样品溶液，25°C孵育1h后取出，制成LAPS传感器；然后将LAPS传感器浸入到pH值为6 .5、浓度为2.0mol/L的PBS缓冲液，在外加偏置电压作用下，LAPS传感器的I-V曲线产生相应的偏移，采用LabVIEW平台记录LAPS传感器的电压偏移值；

（2）根据步骤三所得到的GPC3的工作曲线，计算待测样品中GPC3的浓度。