[发明专利]固定化脂肪酶催化酯水解拆分2-苯基丁酸对映体的方法

权利要求书

1.一种固定化脂肪酶催化酯水解拆分2-苯基丁酸对映体的方法，其特征在于，所述的方法是以共价连接法制备固定化脂肪酶，再通过固定化脂肪酶立体选择性催化2-苯基丁酸酯水解反应得到(S)-2-苯基丁酸和(R)-2-苯基丁酸酯。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的共价连接法制备固定化脂肪酶，是以1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的共价连接法制备固定化脂肪酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，还包括预先采用聚乙二醇对脂肪酶进行酶分子修饰。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，固定化脂肪酶的制备步骤：将南极假丝酵母脂肪酶溶液、聚乙二醇和磷酸缓冲溶液混合搅拌，获得聚乙二醇修饰的酶溶液；以MOFs材料UIO-66作为固定化载体，在反应容器中加入经研磨粉碎的固定化载体和含1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺的磷酸缓冲溶液并搅拌，再加入N-羟基琥珀酰亚胺后搅拌，获得活化载体溶液；将聚乙二醇修饰的酶溶液与活化载体溶液混合搅拌，反应结束后，过滤并收集固体部分，将所得固体冷冻干燥后，得到固定化脂肪酶PEG-CAL-A@UiO-66。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述MOFs材料UIO-66以ZrCl4和对苯二甲酸为前驱体，在DMF溶剂中通过自组装反应合成。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，南极假丝酵母脂肪酶溶液、聚乙二醇和磷酸缓冲溶液以体积计的用量比为4:1:11； MOFs材料UIO-66、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺以重量计的用量比为3:1:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，固定化脂肪酶立体选择性催化2-苯基丁酸酯水解的步骤：在反应容器内加入外消旋2-苯基丁酸酯和固定化脂肪酶，再加入磷酸缓冲溶液作为反应液，搅拌反应，反应结束后，取样进行检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，外消旋2-苯基丁酸酯是从2-苯基丁酸甲酯、2-苯基丁酸乙酯、2-苯基丁酸丙酯、2-苯基丁酸异丙酯、2-苯基丁酸正丁酯、2-苯基丁酸异丁酯、2-苯基丁酸叔丁酯、2-苯基丁酸戊酯、2-苯基丁酸己酯中选择。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，磷酸缓冲溶液的pH为5.5-7.5，以磷酸缓冲溶液作为反应介质，每毫升反应介质投入2-苯基丁酸酯0.001-0.005mmol，每毫升反应介质投入固定化脂肪酶PEG-CAL-A@UiO-66量为10-80mg，反应温度30-90℃。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，固定化酶可重复利用，操作步骤为：水解反应结束后，过滤将固定化酶从反应介质中分离，固定化酶经冷冻干燥后重复使用。