[发明专利]一株耐酸型大肠杆菌噬菌体及其包埋工艺

说明书

本发明公开了一株耐酸型大肠杆菌噬菌体，保藏编号为CGMCC No.21991，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因；该噬菌体具有较好的耐高温性能和较宽的酸碱耐受范围，在通过消化系统的时候，可以有效保存其活性；为工业化生产噬菌体用于禽类养殖环境中致病性大肠杆菌BE‑20166的防治提供了噬菌体来源；本发明还提供了该大肠杆菌噬菌体的包埋工艺，经包埋后的噬菌体性质更加稳定。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一株耐酸型大肠杆菌噬菌体及其在禽类动物致病性大肠杆菌感染中的应用。

背景技术

禽大肠杆菌病是由某些致病性或条件致病性大肠杆菌引起，是危害养禽业最为严重的细菌性疾病之一，在疾病预防和治疗过程中最易产生耐药性，导致抗生素用量增加和禽类产品药物残留等一系列问题。该病一年四季均可发生，但以冬春季节和气温多变时期多发，给养禽业带来严重的经济损失。禽大肠杆菌病在临床上主要通过抗生素防治，但由于抗生素的盲目添加或过量使用，导致大肠杆菌的耐药菌株不断增多、耐药谱不断扩大，进而导致治疗效果下降，养殖效益降低，同时对食品安全构成威胁。目前，大肠杆菌病仍是危害畜禽养殖业的主要细菌性传染病之一。因此基于养殖效益、食品安全和公共卫生方面的考虑，寻找一种新的治疗大肠杆菌病疗效确实、无残留、符合国家减抗或无抗养殖发展方向的抗菌制剂乃当务之急。

细菌耐药性愈发严重，但是新型抗生素的研发速度远落后于细菌耐药性増长的速度，因此需要寻找新的替代抗生素杀菌物质来预防和治疗耐药性感染以进一步减少抗生素的使用。许多研究证实，噬菌体治疗是抗生素治疗的一种很好的替代方法。

噬菌体以其特异性强、与抗生素无交叉抗药性、无残留、对人畜无感染性、容易筛选获得等独特优势成为潜力巨大的选项。噬菌体制剂作为一种新兴的抗菌用品，因其不同于抗生素会引起菌群失调且可减少药物残留问题等诸多优点，越来越受到广泛的关注。

本发明是从养殖场污水中分离出一株酸碱耐受性好、裂解性强，噬菌谱宽的大肠杆菌噬菌体，初步了解其生物学特性，通全基因测序，未发现带有毒力基因和溶原性基因，从基因水平上证明其安全性，并对其生物学特性进行分析，以期为噬菌体防治大肠杆菌的研究提供理论依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一株耐酸型大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140，旨在解决养殖场禽类因感染大肠杆菌，发病急而治疗不及时，且因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。本发明的另一个目的在于提供大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140的应用和包埋工艺。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株耐酸型大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140，透过电镜观察，该大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径70nm，有一个长120nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，为有尾病毒目肌肉尾病毒科；基因长度52804bp，不具有毒力基因和溶原性基因，该噬菌体于2021年03月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.21991。

进一步地，该大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140经65℃处理60min，效价仍保持在10⁸pfu/mL，经80℃处理30min，效价保持在10⁵pfu/mL，对温度有较好的耐受性；在pH4-10的范围内，37℃培养1h，效价仍保持在10¹⁰pfu/mL，在pH＝7时，效价最高，在pH＝12以及pH＝2时，噬菌体仍保持较高的活性，该噬菌体的酸碱耐受范围较宽。

进一步地，该大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140与抗生素具有协同作用。

本发明的另一目的在于提供该大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20140在制备预防和或治疗大肠杆菌引起的疾病的药物中的用途。