[发明专利]具有可视化功能的肿瘤靶向细菌及其可视化方法和应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是将生物发光相关功能基因插入野生型大肠杆菌或者是敲除了限制性内切酶基因的大肠杆菌突变株基因组中构建而成；

其中，所述生物发光相关功能基因包括萤光素酶基因。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，插入位置为大肠杆菌氨基葡萄糖合成酶基因下游。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，出发菌株使用的大肠杆菌具体为大肠杆菌Nissle 1917。

4.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述萤光素酶包括萤火虫萤光素酶、分泌型膜锚定萤光素酶和海肾萤光素酶及其突变体；

优选的，所述萤光素酶选自下组中的任意一个或多个：

。

5.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述限制性内切酶基因包括Gene1-Gene7。

6.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述生物发光相关功能基因包括所述萤火虫萤光素酶及其突变体基因和底物再生酶基因。

7.权利要求1-6任一项所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

构建生物发光元件质粒，将具有生物发光功能的目的基因元件重组至大肠杆菌基因组中进行表达即得。

8.如权利要求7所述的构建方法，其特征在于，其中，所述具有生物发光功能的目的基因元件包括萤光素酶基因元件；

所述萤光素酶基因元件包括萤火虫萤光素酶及其突变体-底物再生酶串联基因元件，分泌型膜锚定萤光素酶及其突变体基因元件和海肾萤光素酶及其突变体基因元件；

优选的，所述萤火虫萤光素酶及其突变体-底物再生酶串联基因元件质粒，其构建方法包括：

上述萤火虫萤光素酶以及突变体的基因与EGFP标签基因融合、底物再生酶(LRE)基因与mCherry基因融合，与pMB1复制子，组成型lac启动子组装构建萤火虫类表达质粒；

优选的，所述大肠杆菌为大肠杆菌Nissle 1917；

优选的，所述大肠杆菌Nissle 1917为野生型大肠杆菌Nissle 1917或者敲除了上述限制性内切酶基因的大肠杆菌Nissle 1917；

优选的，将“将所述目的基因元件重组至大肠杆菌基因组中”具体为将所述元件基因重组至大肠杆菌基因组中glm S基因下游。

9.权利要求1-6任一项所述基因工程菌在如下任意一种或多种中的应用：

a)成像示踪和/或制备成像示踪产品；

b)肿瘤检测和/或制备肿瘤检测产品；

c)肿瘤靶向治疗和/或肿瘤靶向治疗产品；

d)肿瘤靶向疗法临床前研究。

10.一种肿瘤可视化检测方法，其特征在于，所述方法包括向受试者施用权利要求1-6任一项所述基因工程菌。