[发明专利]用于分离细胞外核酸的快速方法

权利要求书

1.一种通过将细胞外核酸结合于带有阴离子交换基团的固相以从样品分离所述细胞外核酸的方法，所述方法包括下列步骤：

a.在允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的第一pH下，将所述细胞外核酸结合于所述固相，

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.任选地从所述固相洗脱细胞外核酸。

2.权利要求1的方法，其包含下列步骤：

a.在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的第一pH；其中所述样品占所述结合混合物体积的至少85％；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.任选地从所述固相洗脱细胞外核酸。

3.权利要求1或2的方法，其包含下列步骤：

a.酸化所述样品以建立结合条件，并在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的≤6.5的第一pH，其中所述样品占所述结合混合物体积的至少85％，并且其中所述固相由磁性粒子提供；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.从所述固相洗脱细胞外核酸。

4.权利要求2或3的方法，其包含下列步骤：

a.酸化所述样品以建立所述结合条件，并在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的≤6.5的第一pH，其中所述样品占所述结合混合物体积的至少85％，并且其中所述固相由带有叔氨基、优选为二烷基氨基、更优选为二乙基氨基丙基的磁性粒子提供；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.从所述固相洗脱细胞外核酸，其中被洗脱的核酸的长度和保持结合于所述阴离子交换基质的核酸的长度通过调整洗脱条件来控制，其中长度为约1000nt或更长、优选地700nt或更长、更优选地500nt或更长的核酸在所述洗脱步骤中绝大多数保持结合于所述固相。

5.权利要求3或4的方法，其中在步骤d.中，通过调整所述固相表面上正电荷的浓度，使得在步骤d.期间只有较长的核酸分子保持结合于所述固相，而较小的核酸被洗脱，来实现短核酸的选择性洗脱，其中截止值通过选择在洗脱期间使用的pH值来控制。

6.权利要求1至5的一项或多项的方法，其中在步骤d.中，细胞外核酸按照它们的尺寸被选择性洗脱，其中所述尺寸分级洗脱步骤包括在高于所述第一pH的第二pH下洗脱一部分结合于所述固相的细胞外核酸，其中在这一步骤中从所述固相洗脱的核酸的平均长度短于保持结合于所述固相的核酸的平均长度。

7.权利要求2至6的一项或多项的方法，其通过将细胞外核酸结合于带有阴离子交换基团的固相，用于从贫细胞或无细胞样品、优选为血浆或血清分离所述细胞外核酸，其中所述固相由优选地带有叔胺、优选地包含二乙基氨基丙基的磁性粒子提供，所述方法包括下列步骤：

a.酸化所述样品以建立所述结合条件，并在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的≤6的第一pH，其中所述样品占所述结合混合物体积的至少85％；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.从所述固相洗脱细胞外核酸，其中在步骤d.中，细胞外核酸按照它们的尺寸被选择性洗脱，其中所述尺寸分级洗脱步骤包括在高于所述第一pH并≥8的第二pH下洗脱一部分结合于所述固相的细胞外核酸，其中在这一步骤中从所述固相洗脱的核酸的平均长度短于保持结合于所述固相的核酸的平均长度，并且其中长度为约1000nt或更长、优选地700nt或更长、更优选地500nt或更长的核酸在所述洗脱步骤中绝大多数保持结合于所述固相。