[发明专利]银杏内生球黑孢菌生物农药及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种银杏内生球黑孢菌生物农药及其制备方法与应用。该生物农药包括银杏内生球黑孢菌发酵液和葡萄糖、玉米浆。抑菌实验显示，该生物农药能有效的抑制姜青枯菌的生长和繁殖，与阳性对照农用硫酸链霉素效果相当；田间试验显示，该生物农药对姜青枯病的防治达到80％以上，与农用硫酸链霉素效果相当。本发明采用银杏内生球黑孢菌发酵液制备生物农药，绿色安全无污染，且不易产生抗药性，能对姜青枯病进行有效防控。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种银杏内生球黑孢菌生物农药及其制备方法与应用。

背景技术

姜青枯病，俗称姜瘟病，是由姜青枯菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种重大病害，严重影响着我国生姜的产量和品质，据调查，生姜主产区常年由于姜青枯病的危害而损失20％～30％，重者可达80％以上，且一旦大面积发病，很难采取补救措施，给姜农带来巨额损失。腐烂的生姜中还含有对人体有害的黄樟素，影响人类的健康。

银杏(Ginkgo biloba)是我国有大量栽培的世界珍稀树种，在其生长过程中几不会或很少感染病虫害。一方面是由于银杏自身在代谢过程中产生的抑菌活性物质，比如银杏黄酮、内酯、银杏酸等；另一方面，与银杏共生的内生菌代谢长生的抑菌抗菌次级代谢物，二者协同对病虫害进行防御。因此，银杏提取物或银杏内生菌均可开发作为生物农药使用。但是，受限于气候、土地资源和生长周期，银杏提取物作为生物农药开发具有一定的局限性；而银杏内生菌生长繁殖速度快，不受气候、土地和生长周期限制，更具有应用开发价值。发明人在前期工作中筛选到一株银杏内生真菌，具有抗青枯菌的活性，经鉴定为球黑孢菌(Nigrospora sphaerica，保藏编号为CCTCCM 2018755)，已申请专利保护菌株(ZL201811382974.5)。实验室试验显示，该菌株对姜青枯菌具有明显的拮抗作用，是一种应用开发潜力巨大的生防菌。

发明内容

本发明的目的在于提供一种银杏内生球黑孢菌生物农药及其制备方法与应用。

一种银杏内生球黑孢菌生物农药，包括银杏球黑孢菌发酵液、葡萄糖和玉米浆。

所述葡萄糖的终浓度为5-15g/L。

所述葡萄糖的终浓度为0.5-2g/L。

所述银杏内生球黑孢菌生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：

(1)银杏球黑孢菌的活化：取-80℃保藏的菌株，用接种环挑取孢子，在PDA斜面培养基上划线，在28℃恒温培养箱中培养5-7天，直至试管中长满菌丝；

(2)种子液的制备：用接种环取活化的菌丝，接种到装有100mL PDB液体培养基的500mL规格的摇瓶中，培养20-30h；

(3)发酵：采用发酵罐进行发酵，发酵培养基为PDB培养基，装液量为60％，发酵温度28-32℃，溶氧全程控制在25-35％，溶氧与转速进行关联控制，通过调节转速来控制和调节溶氧，转速设置最低600rpm，最高1200rpm；发酵120h后，待发酵液变为深红色，每隔12h取样用HPLC检测9α-羟基二氢脱氧卷线孢菌素(9α-hydroxydihydrodesoxybostrycin)浓度，当其浓度在1.0g/L以上，终止发酵，制成发酵液；

(4)按照葡萄糖终浓度10g/L，玉米浆终浓度1g/L添加相应重量的葡萄糖和玉米浆，溶解混匀，即为制备的生物农药。

所述发酵罐采用5L发酵罐。

所述发酵罐的通气量为5L/min，pH 7.0，分别用20％NaOH和20％磷酸溶液调节pH。

所述银杏内生球黑孢菌生物农药防治姜青枯菌的用途。