[发明专利]一种抗AFP的纳米抗体1A7及其应用

说明书

本发明公开了一种抗AFP的纳米抗体，所述纳米抗体具有独特的3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3，本发明还提供了含有该纳米抗体可变区编码序列的表达载体，含有该表达载体的宿主细胞，以及所述纳米抗体在制备肿瘤治疗药物和肿瘤诊断试剂中的应用。本发明提供的纳米抗体对AFP具有特异的识别和结合能力，该纳米抗体亲和力可达到1.439E‑09，具有独特的抗原决定簇识别位点，对癌细胞具有显著的ADCC效应，而且能够在AFP血清检测特别是双抗体夹心法中获得优异的检测效果。

技术领域

本发明公开了一种纳米抗体，属于免疫学领域。

背景技术

肝细胞性癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界第五大癌症，我国发病人数约占全球55％，在我国所有肿瘤的死亡率中排行第2，仅次于肺癌。甲胎蛋白(甲种胎儿蛋白，α-fetoprotein，AFP)最早是由Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现，是目前应用最广泛的HCC肿瘤标志物，被普遍应用于相关疾病的检查。AFP是一种糖蛋白，属于白蛋白家族，分子量为69kDa，一般情况下AFP主要由胚胎肝脏细胞分泌而来。因为其糖链结构的差异，AFP分子存在差异性，目前认为至少有三种异质体(AFP2L1，AFP2L2，AFP2L3)。AFP存在于人血清中，来源于早期胎儿的肝脏和卵黄囊，孕期4周即可在胎儿血清中检测到，最高可达l～3g/L，出生时仍高达60～120mg/L，出生后合成很快受到抑制，含量降至50μg/L，一周岁婴儿的血清AFP浓度水平接近成人。健康成人血清中AFP主要由肝脏产生，生理功能尚不清楚，可能与维持正常妊娠、调节脂肪酸进入胎儿体内及免疫抑制有关。正常成年人血清AFP水平非常低，一般低于10μg/L。肝细胞癌变时，AFP水平随着疾病进展会显著升高，目前，我国建议的临界值上限为20μg/L。AFP是我国目前在临床唯一推荐常规使用的肝细胞癌肿瘤标志物，同时结合超声检查，对无症状的高危人群进行筛查，是临床早期发现肝癌患者的最常用方法。随着医疗水平的不断提高，肝细胞癌的诊断和治疗水平不断进步，但肝细胞癌的临床死亡率仍居高不下，究其原因，与肝细胞癌发病隐匿，自觉症状不明显，造成就医确诊晚有关。提高肝细胞癌患者早期诊断率，同时在治疗过程中通过有效的方法手段进行监测是提高肝细胞癌治疗质量和生存率的关键所在。基于以上原因，目前首要任务是建立简单、快速、有效的检验方法。

不仅如此，自上世纪90年代以来，研究者利用AFP作为载药载体，运输抗癌药物，如阿霉素、柔红霉素、顺铂、甲氨蝶呤等成为热门研究内容，通过胞吞作用将上述药物选择性转运至肿瘤细胞中，起到治疗作用。此外，Meng和Sauzay等研究发现，AFP可以与肝癌细胞膜上的受体结合，进而激活Ca²⁺和PI3/AKT等信号通路，通过上调c-fos、Srs、c-jun、Ras等癌基因的表达，促进肝癌细胞的增殖(Meng WenBo等，The immunosuppression role of alpha-fetoprotein in human hepatocellular carcinoma，Discovery medicine，2016年21卷118期；ChloéSauzay等，Alpha-foetoprotein(AFP):Amulti-purpose marker inhepatocellular carcinoma，Clinica Chimica Acta，2016年463卷)。因此，AFP无论是在疾病的诊断、靶向治疗还是后期的预后监测方面都发挥着巨大的作用。