[发明专利]一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法及其制备的荧光探针和应用

权利要求书

1.一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备不同粒径的纳米金，利用荧光光谱，以200nm为起点，以3～8nm为增长幅度连续改变激发光波长，直至最高发射峰的峰值不再升高，取1cm荧光比色皿，用移液枪取纳米金2mL于比色皿中；用荧光光谱仪进行扫描，观察其荧光光谱；

S2、取1cm荧光比色皿，用移液枪取纳米金2mL于比色皿中，以步骤S1测得的发射峰的最高峰值作为发射波长，观察其荧光光谱，测定纳米金的激发波长；

S3、取制备好的纳米金，利用荧光光谱仪在400～600nm波长下进行扫描，观察其出峰情况，确定最高吸收峰出现时的波长；再加入浓度为25μmol/L Mb进行结合，每加0.02mL反应一段时间后进行1次荧光扫描，直至峰值猝灭，停止加入Mb，此时由Mb与AuNPs自组装制备的荧光纳米团簇Mb-AuNPs形成；

S4、纳米团簇制备好后，加入浓度为0.3×10^-5mol/L的SH-β-CD，避光搅拌，即可得到灰蓝色悬浊液SH-β-CD@Mb-AuNPs纳米荧光探针。

2.根据权利要求1所述的一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述纳米金的粒径为10～22nm。

3.根据权利要求1所述的一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S3中，每加0.02mLMb反应3～8min后进行1次荧光扫描。

4.根据权利要求1所述的一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S4中，所述避光搅拌的时间为18～30h。

5.根据权利要求1所述的一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S4中，所述SH-β-CD的加入量为0.25～1.25mL。

6.一种如权利要求1所述的一种检测亚硝酸盐自组装荧光探针的制备方法制备的一种荧光探针。

7.一种如权利要求6所述的荧光探针在亚硝酸盐定量检测中的应用。

8.一种如权利要求7所述的应用，其特征在于，该应用包括以下步骤：

1)取制备好的SH-β-CD@Mb-AuNPs荧光探针于烧杯中，加入柠檬酸钠缓冲液，混合均匀后，测定荧光强度；

2)在SH-β-CD@Mb-AuNPs荧光探针中，分别加入柠檬酸钠缓冲液和已知不同浓度的亚硝酸盐溶液，溶液混合均匀后，测定荧光光谱，根据荧光数据绘制回归方程；亚硝酸盐溶液浓度c在0.01～1μmol/L和1～5μmol/L范围内与荧光强度变化△F均呈现出可靠的线性关系，该荧光探针对亚硝酸盐的定量检测性能良好，线性方程为：

△F₁＝43.09c₁+28.50，△F₂＝11.35c₂+60.19

3)需要测定未知浓度的亚硝酸盐溶液浓度时，在SH-β-CD@Mb-AuNPs荧光探针中，分别加入柠檬酸钠缓冲液和未知浓度的亚硝酸盐溶液，溶液混合均匀后，测定荧光光谱，根据回归方程计算出亚硝酸盐溶液的浓度。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：步骤1)和步骤2)中，所述测定荧光强度的激发波长为200～300nm。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：步骤1)和步骤2)中，所述柠檬酸钠缓冲液的浓度为0.1～0.5mol/L，所述柠檬酸钠缓冲液的pH为4～8。