[发明专利]抗CD5蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人CD5抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取CD5蛋白C末端的第398位至第495位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含CD5蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗CD5蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株11H3,以及由该细胞株所分泌的抗CD5蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD5蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗CD5蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

人类CD5基因位于染色体11q12.2位置，CD5分子是T细胞和处女B细胞的一个亚类中表达的67KD的跨膜糖蛋白，CD5是一个具有巨噬细胞清道夫受体富含半胱氨酸(SRCR)域同源结构域的受体家族的成员，这些CD5阳性的B细胞可以产生自身抗体，也可以在自身免疫性疾病和淋巴组织的恶性肿瘤中的扩散，如白血病，MCL和CD5阳性的DLBCL。不同于小鼠B1细胞表达CD5，人类B1细胞不具有CD5的表达。在敲除小鼠和鸡CD5基因的细胞无功能的鸡蛋溶菌酶转基因模型实验表明，在体外实验中CD5表达促进细胞耐受自身反应性抗原而CD5分子的缺失将导致增强细胞的增殖反应。

CD5曾被认为是B细胞受体信号的负调节因子，能改变细胞内钙离子的动员，能通过激活一系列信号途径包括ERK1/2，PI3K和钙调磷酸酶通路调节B细胞的功能。此外，CD5通过刺激自分泌IL-10的产生促进B细胞的生存，另一项研究表明，在CLL的B细胞中的CD5是被磷酸化的，某些基因在CLL的B细胞中过表达，如BCL2、某些趋化因子和细胞因子。此外，CD5阳性的CLL B细胞被证明促进CLL恶性细胞表型和代谢途径。这些结果表明CD5在B细胞中的表达以许多种不同的方式影响恶性淋巴瘤细胞。在DLBCL中导致超表达的CD5的确切的机制尚不清楚。大多数在CD5对B细胞功能影响的研究都是在来自患者自身免疫疾病和慢性淋巴细胞白血病(CLL)的细胞进行的。

发明内容

发明人提供了一种抗CD5单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CD5蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG1κ亚型单克隆抗体。

进一步地，由保藏号为CGMCC NO 20767的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗CD5蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含CD5蛋白片段及组氨酸蛋白标签；所述CD5蛋白片段为CD5蛋白的第398位至第495位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

发明人还提供了一株分泌抗CD5蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株11H3，所述细胞株已于2020年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 20767，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

发明人还提供了上述单克隆抗体在CD5蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。