[发明专利]一种靶向肿瘤的端粒酶检测系统、端粒酶检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种靶向肿瘤的端粒酶检测系统，其特征在于，所述检测系统为DNA四面体，所述DNA四面体其中一对顶点具有DNA三链体，另一对顶点具有DNA双链体；

所述DNA三链体由发夹DNA链及端粒酶引物链组成；所述DNA双链体中荧光剂标记的长链及淬灭剂标记的短链部分杂交；

所述DNA三链体中，所述三链体中TAT碱基对含量占所述三链体中三碱基对含量的70％；所述发夹DNA链为DNA四面体组成核苷酸链在顶点处的自身回折；所述端粒酶引物链包括两部分，其5’端为发夹DNA链的互补链，3’端为端粒酶的引物序列；所述端粒酶的引物序列为AATCCGTCGAGCAGAGTT；

所述DNA双链体中，所述长链为DNA四面体核苷酸链延伸出DNA四面体的部分，所述延伸部分包括与短链的互补端及暴露的立足点，所述立足点长度为4～6个碱基。

2.如权利要求1所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统，其特征在于，所述立足点长度为5个碱基。

3.如权利要求1所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统，其特征在于，所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统的制备方法，将四面体DNA，SD链和HTS链的单链寡核苷酸加入缓冲液中混合，将混合体系加热后迅速冷却；

SD链的序列如SEQ ID NO:5所示；

HTS链的序列SEQ ID NO:12；

所述DNA四面体中D1，D2，D3，D4，SD链和HTS链以1：1：1：1：2：2的摩尔比进行混合；

D1链的序列如SEQ ID NO:1所示；D2链的序列如SEQ ID NO:2所示；D3链的序列如SEQID NO:3所示；D4链的序列如SEQ ID NO:4所示；

所述D1至D4代表DNA四面体组成的寡核苷酸，SD代表淬灭剂标记的短链，HTS表示端粒酶引物链。

4.如权利要求3所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统，其特征在于，所述加热的温度为90～100℃，加热时间为2～4min；

或，所述缓冲液为TM缓冲液，其中Tris浓度为15～25mM，MgCl₂浓度为45～55mM。

5.如权利要求3所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统，其特征在于，将混合体系加热并在95℃下保持3分钟，反应结束后将混合体系加入冰水浴中迅速冷却至温度降至4℃。

6.如权利要求3所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统，其特征在于，所述制备方法中，还包括验证步骤，将退火后的组件通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过泳道中条带的迁移速率判断是否合成所述端粒酶检测系统。

7.一种肿瘤诊断试剂盒，其特征在于，所述肿瘤诊断试剂盒中包括权利要求1-6任一项所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统。

8.一种体外筛选抗肿瘤活性成分的方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求1-6任一项所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统对肿瘤模型中的端粒酶含量进行检测。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：获取待筛选化合物处理后的肿瘤模型，与权利要求1-6任一项所述靶向肿瘤的端粒酶检测系统共孵育后对其荧光强度进行检测。