[发明专利]单一位点嵌合巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原及其制备和应用

权利要求书

1.一种嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，其特征在于，所述重组抗原包括兔出血症病毒VP60蛋白，其N端连接巴氏杆菌PlpE蛋白抗原表位多肽片段。

2.根据权利要求1所述一种嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，其特征在于，连接在兔出血症病毒VP60蛋白N端的巴氏杆菌PlpE蛋白抗原表位是PlpE蛋白抗原的第21位到第200位氨基酸的多肽片段。

3.根据权利要求1所述嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，其特征在于，所述VP60蛋白N端嵌入的PlpE抗原表位氨基酸序列为SEQ ID NO:1；其核苷酸序列为：SEQ ID NO:3。

4.根据权利要求1所述一种嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，其特征在于，所述嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。

5.根据权利要求1所述一种嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，其特征在于，编码所述嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。

6.一种重组抗原的表达载体，其特征在于，所述载体用于表达嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，含有权利要求4所述核苷酸序列。

7.一种制备权利要求1所述嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原制备方法，其步骤如下：

(1)通过PCR扩增巴氏杆菌PlpE的N端第21位到第200位氨基酸所对应的DNA序列;

(2)将步骤(1)得到PCR产物分别连接到VP60基因N端，并将重组基因连接到pFastBac1克隆位点上,得到重组穿梭质粒载体;

(3)将步骤(2)得到的重组穿梭载体转化到DH10Bac宿主菌中，通过该菌的转座作用获得重组杆状病毒质粒Bacmid-PlpE-VP60；

（4）将重组杆状病毒质粒转入sf9细胞后获得嵌合了巴氏杆菌PlpE表位的兔出血症病毒VP60重组蛋白抗原PlpE-VP60。

8.权利要求1所述嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原在制备预防兔病毒性出血症和兔巴氏杆菌病疫苗方面的应用。