[发明专利]一种pickering乳液及其制备方法和作为疫苗免疫佐剂中的应用

说明书

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种pickering乳液及其制备方法和作为疫苗免疫佐剂的应用。本发明制备的GO‑LP Pickering乳液经稳定性测试和体内外评估，显示出良好的稳定性和明显增强的佐剂效果；以CtpORF5重组蛋白疫苗为模式抗原，建立小鼠生殖道抗Ct感染模型，评估了GO‑LPPickering佐剂对机体的免疫保护力和安全性，结果显示，本发明提供的GO‑LPPickering乳液能够显著增强小鼠体液免疫，且安全性较高。因此，具有增强免疫反应，提高疫苗免疫保护力的潜在价值。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种pickering乳液及其制备方法和 作为疫苗免疫佐剂中的应用。

背景技术

传染性疾病一直是威胁人类健康最大的因素，尤其是新型病原体导致的 疾病往往给全球卫生事业带来巨大挑战，给人类生产生活带来严重影响甚至 是致命打击。佐剂可降低疫苗用量，增强免疫原性，在疫情爆发时有效应对 疫苗产量及供应问题。目前已批准使用的佐剂主要包括铝盐类、乳剂类，Toll 样受体激动剂类等。传统铝佐剂虽已广泛应用于多种疫苗，但其只能增强体 液免疫不能增强细胞免疫且对亚单位疫苗作用有限，其它佐剂如脂质体、免 疫调节物类、寡核苷酸类、多糖类、细胞因子类等目前均尚未实现临床应用， 因此探索安全高效的新型佐剂仍是疫苗学研究的重点。

乳液(Emulsion)是除铝佐剂外应用最广泛的佐剂类型。乳液作为佐剂 具有以下特征：保护抗原、增加抗原表面积，调节免疫应答、缓释抗原、物 化性质优良；加之制备方法简单，成本较低，适合大规模生产，因而被认为 是一种优良的疫苗佐剂。但仍存在以下几方面问题有待解决:

1.安全性和稳定性有待进一步改善；

2.免疫增强机制未予阐明，目前研究认为乳液类佐剂通常与免疫细胞募 集、抗原摄取有关，并倾向于Th1型免疫反应，与TLR无关，但深层次的免 疫应答机制未知；

3.具体的剂量、免疫程序和节省抗原的程度未明晰，难以衡量乳液佐剂 对疫苗的辅助作用究竟到达何种程度，与目前已批准使用的佐剂对比是否效 果更好。因此，提供一种既能避免使用表面活性剂又能稳定油水界面的乳液 体系，并将其设计成新型的佐剂具有重要的现实意义。

Pickering乳液是指采用固体粒子稳定油水体系的一种特殊乳液。相较普 通乳液，Pickering不需添加表面活性剂，且引入固体粒子的浓度大大低于表 面活性剂的用量，对人体和环境的毒害作用远小于表面活性剂，故而安全性 可能更高；另外，固体粒子在油水界面发生不可逆吸附，形成的界面膜牢固， 可防止液滴聚并，因此Pickering乳液体系不易受外界酸碱性、盐浓度、温度 及油相组成的影响，具有更强的稳定性。Xia等构建了基于PLGA粒子稳定的 Pickering乳液，发现其佐剂效果明显优于以传统表面活性剂稳定的普通乳液 佐剂，且优化的Pickering乳液可激活抗原呈递细胞并增强抗原募集。沙眼衣 原体会引起眼部或生殖器感染，其主要并发症包括致盲性沙眼和生殖功能障 碍，例如尿道炎，宫颈炎和输卵管炎，根据世界卫生组织发布的最新估计， 每年登记的新病例超过1.3亿。可导致生殖后遗症，如盆腔炎(PID)，早产和 梗阻性不育。据估计，40％-60％的PID病例和30％的异位妊娠是由沙眼衣原 体感染引起的，给人类医疗保健造成巨大的社会经济负担我国自2001年监控 以来，报告的Ct病理数目已超过淋病，居8种性传播病原体首位。因此，合 理设计一种新型的Pickering乳液作为Ct疫苗佐剂解决普通乳液的安全性和稳 定性问题，具有及其重要的价值和意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种pickering乳液及其制备方法和其作为疫苗 免疫佐剂的应用。本发明提供的pickering乳液具有良好的稳定性和明显增强 的免疫效果，且安全性高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种pickering乳液的制备方法，包括：