[发明专利]双位点嵌合巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原及其制备和应用

说明书

本发明属生物医学技术领域，提供了一种双位点嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，所述重组抗原通过在分析巴氏杆菌保护性抗原PlpE表位组成的基础上，将PlpE表位集中分布的一段区域（长度合计70个氨基酸）分两段嵌合展示到兔出血症病毒VP60蛋白N端和C端而获得。免疫保护力实验表明该嵌合重组抗原对兔出血症病毒和巴氏杆菌均具有良好的免疫保护力。本发明仅耗费一份人工就可以制备出针对两种病原的抗原，简化了工艺，缩短了制备时间，显著降低了生产成本，为后期生产更低成本的兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病疫苗提供了基础。

技术领域

本发明属生物医学技术领域，具体涉及一种嵌合了巴氏杆菌抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原及其制备方法和应用。

背景技术

兔病毒性出血症，俗称兔瘟，是由兔出血症病毒( Rabbit hemorrhagic diseasevirus，RHDV) 引起的一种具有高度传染性、高发病率、高致死性的疾病，主要发生于 2 月龄以上成年兔。RHDV 衣壳蛋白 VP60 由 579 个氨基酸组成，是病毒衣壳组成的最基本单位。衣壳蛋白 VP60 是病毒的免疫保护性抗原，与诱导机体抗感染免疫直接相关，单独表达VP60蛋白能够自聚成病毒样颗粒，由其制成的疫苗已经用于兔病毒性出血症的预防。

兔巴氏杆菌病（Pasteurellosis）是主要由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）引起的一种危害养兔业的主要细菌性疫病。各种年龄、品种的家兔对于多杀性巴氏杆菌均易感，尤其2-6月龄的家兔易感染发病，该病是造成9周龄到6月龄家兔死亡的主要疫病之一。目前已经有PlpE等保护性抗原报道，动物实验显示出良好的免疫保护效力。

目前已经有兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病二联灭活疫苗用于同时防控兔病毒性出血症和兔巴氏杆菌病。但是该疫苗存在着生产成本偏高等、对巴氏杆菌病的免疫保护效果并不理想等问题。传统兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病二联灭活疫苗的制备工艺是先分别制备兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌灭活疫苗，再进行物理混合制成联苗。这种二联苗的生产过程需要经历两个疫苗的生产过程，耗费两份人工及物料、水电等，增加了生产成本。虽然近年来有使用基因工程亚单位疫苗（以VP60和PlpE等为抗原）取代传统细菌或病毒灭活疫苗的趋势，但是目前基因工程二联亚单位疫苗的生产工艺依然需要经历分别制备单苗然后物理混合的过程，生产成本并未显著降低。因而将不同抗原及其表位嵌合连接在一起构成新抗原的方案正成为新的联苗发展方向，这将使二联疫苗生产过程简化，有效降低生产成本。

本发明的目的是将巴氏杆菌保护性抗原PlpE的表位嵌合展示到兔出血症病毒VP60上，从而获得一种新的兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病二联亚单位疫苗所需抗原。

发明内容

本发明所解决的技术问题是：通过构建嵌合有巴氏杆菌保护性抗原PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组蛋白抗原，获得一种只耗费一份人工就能够生产出对兔出血症病毒和巴氏杆菌都具有免疫保护作用的重组蛋白抗原，从而应用于兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病二联疫苗制备

为了解决上述技术问题，本发明提供一种双位点嵌合了巴氏杆菌PlpE抗原表位的兔出血症病毒VP60重组抗原，所述重组抗原包括兔出血症病毒VP60蛋白，且其N端和C端分别连接了PlpE up多肽片段和PlpE down多肽片段；其中，PlpE up多肽片段和PlpE down多肽片段源自巴氏杆菌PlpE蛋白抗原表位。

所述VP60蛋白N端和C端所嵌入的PlpE抗原表位氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

编码所述VP60蛋白N端和C端所嵌入的PlpE抗原表位核苷酸序列分别为SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4。