[发明专利]一种微波协同复合酶解制备樟叶越橘提取物的方法

说明书

本申请公开了一种微波协同复合酶解制备樟叶越橘提取物的方法，采集樟叶越橘的叶芽，经自然干燥后粉碎成粉末；取粉末加入到微波提取瓶，按料液比1∶10～60加入水作为提取溶剂，加入样品质量不超过5％的复合酶，微波提取功率为100‑800W，提取温度30‑60℃，酶解0.5～2.5h；酶解结束后灭酶活，抽滤，滤液减压浓缩，干燥，获得樟叶越橘粗提取物。本申请的微波协同复合酶解制备樟叶越橘提取物的方法，操作容易，步骤少，安全无毒，是一种绿色环保的工艺。实验证实，提取物中有效成分含量高表现出优异的供氢能力、ABTS⁺·自由基清除能力、HO·自由基清能力和还原能力，抗氧化活性比普通水提法高；急性毒性试验表明产品是安全可靠的。

技术领域

本发明属于植物提取物技术领域，具体涉及一种微波协同复合酶解制备樟叶越橘提取物的方法。

背景技术

科学技术迅速发展给人类生活带来便利，也给人类健康带来潜在威胁。辐射，包括电离辐射(X射线、γ射线等)和非电离辐射(红外线、紫外线、微波、激光等)，已成为继水、大气、噪音污染后的第四大污染。生物体遭受有害辐射刺激时会出现氧化应激，体内产生超氧阴离子、羟基自由基等各种活性自由基。自由基是含有一个或多个不对称电子的原子、分子或离子，是维持正常生命活动所必需。正常机体内有多种自由基清除途径，自由基产生与消除处于动态平衡以保证生物体的正常生命活动，但机体内过多的自由基会攻击其他分子使其形成新自由基，进而进攻生物体组织细胞的生物膜和DNA引起细胞损伤和功能紊乱，导致多种疾病的产生与恶化。现代病理学研究表明，自由基与动脉粥样硬化、肝病、糖尿病、机体衰老、癌症等许多疾病有关。

外源性自由基清除剂可降低氧化应激而实现辐射防护，酚类化合物的酚羟基可与氢自由基、超氧阴离子和羟基自由基等活性自由基反应，有效清除或减少因辐射产生的过量活性自由基，从而降低细胞内自由基水平以保护细胞免受辐射损伤，达到有效的辐射防护目的。

植物多酚是植物抗逆应答的重要参与者，在自然界中储量丰富。强紫外线辐射逆境下，为进行自我保护，植物体会产生大量酚类次生代谢物累积于根、茎、叶、皮和果实中，这些酚类物质常以酯合或糖苷化形式累积于根、茎、叶、皮和果实中，如紫外线辐射条件可诱导花青苷、生育酚苷等酚苷类物质的累积，且含量和组成会随辐射量与时间发生改变。许多具有抗紫外线活性的树木提取物被证实可有效清除自由基，其中具有多元酚羟基的植物多酚表现出较强的自由基清除能力和紫外光吸收能力，如姜黄素、白黎芦醇、儿茶素等植物多酚因有较强的自由基清除能力而得到广泛研究和应用。

天然辐射防护剂多用植物水提或醇提物为主，由于植物提取物成分复杂，天然活性分子普遍存在含量低、数量少的问题，且植物多酚结构和活性复杂多样，较难确定其主要的抗氧化活性成分和体内抗氧化应激作用的机理，使一些具有较好活性的化合物在实际应用中缺乏科学依据。而且植物提取物中的活性成分差异很大，通常都是某些特殊树种群体所独有的属性，单纯依靠盲目的提取和活性筛选工作量大、耗时耗力且难以得到理想物质，而且很多提取物因来源受限、安全性差或活性弱等原因没有实际应用价值，只有极少提取物作为抗氧化剂成功应用于国民生产。

樟叶越橘(Vaccinium dunalianum Wight)是杜鹃花科越橘属常绿灌木，兼具有食用和药用价值，蓝莓是该属开发利用较为成熟的植物资源。我国越橘属资源丰富，樟叶越橘在云南、四川、贵州、西藏等地区广有分布，仍有大量野生资源尚未得到有效开发利用。考虑到逆境胁迫会在极大程度上影响植物体内酚类物质累积水平，对云南高原地区樟叶越橘进行了系统的化学成分研究，发现该植物富含酚类物质，从中筛选天然辐射防护剂有利于扩充资源来源。

现有常用的樟叶越橘提取物的制备方法，主要为水提法，例如CN101297692B主要采用沸水煎煮和大孔吸附树脂吸附相结合的方式制备樟叶越橘提取物，CN111040006B主要采用沸水提取结合有机溶剂萃取的方式制备樟叶越橘提取物，这两种方法，均在一定程度上提取并获得有效成分，在它们的提取率较低，浸提的时间长，有效成分得率低，还不能完全满足使用需求。

发明内容