[发明专利]一种结合肉毒杆菌的自体胶原蛋白注射剂

权利要求书

1.一种结合肉毒杆菌的自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，所述自体胶原蛋白注射剂的制备原料，包括：成纤维细胞和胶原蛋白、林格氏液l、葡萄糖液和肉毒杆菌，所述成纤维细胞和胶原蛋白、林格氏液l、葡萄糖液和肉毒杆菌的质量体积比为10g：5ml～20ml：10ml～30ml：5μg～20μg。

2.根据权利要求1所述自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，所述自体胶原蛋白注射剂中还加入有几丁质。

3.如权利要求2所述自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，每10g成纤维细胞和胶原蛋白中加入几丁质0.2g～2g。

4.如权利要求3所述自体胶原蛋白注射剂法，其特征在于，所述自体胶原蛋白注射剂中还加入有成纤维细胞生长因子。

5.如权利要求4所述自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，每10g成纤维细胞和胶原蛋白中加入成纤维细胞生长因子2mg～10mg。

6.根据权利要求1～5任一项所述自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，所述成纤维细胞和胶原蛋白的制备方法，包括：

步骤一，获取自体成纤维组织，在常温下用生理盐水清洗，将自体成纤维组织剪成小块，向其中加入磷酸缓冲盐溶液混合，室温下离心去除下层液体，用磷酸缓冲盐溶液冲洗后再次离心，去除上清液，加入胶原酶，放置于37℃恒温震荡箱中30min～60min，再次离心去除上清液，然后加入含有胎牛血清的DMEM培养液，用细胞筛过滤后离心去除上清液，再次加入含有胎牛血清的DMEM培养液中，在37℃温度条件下，5％CO₂恒温培养；

步骤二，传代培养，将步骤一的成纤维细胞每隔2天更换胎牛血清的DMEM培养液，待细胞生长至80％融合后用胰蛋白酶消化后传代，在成纤维细胞生长三代以后，从胎牛血清的DMEM培养液重取出；

步骤三，胶原蛋白积累，将成纤维细胞放入无血清培养基，在37℃无血清培养基中培养，使成纤维细胞分泌出胶原蛋白；

步骤四，将成纤维细胞和胶原蛋白从无血清培养基中取出，得到纤维细胞和胶原蛋白。

7.如权利要求6所述自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，在步骤一中，离心速度为1200rpm～3500rpm，离心时间为2min～5min。

8.如权利要求6所述的自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，在步骤二中，胰蛋白酶为质量分数为0.25％的胰蛋白酶。

9.如权利要求6所述自体胶原蛋白注射剂，其特征在于，在步骤三中，成纤维细胞在无血清培养基中培养时间为12h～60h。