[发明专利]一种干细胞的制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种干细胞的制备方法及其应用。本发明提供了干细胞的制备方法，所述干细胞使用的培养基为无血清培养基，所述干细胞为牙髓间充质干细胞，所述方法获得的干细胞用于抑制激活的T细胞以及免疫系统疾病的治疗。本发明研究发现，在无血清培养基培养下获得的hMSC‑DP，诱导T细胞凋亡的能力强于在有血清培养下获得的细胞，同时，将无血清培养的hMSC‑DP用于治疗DSS诱导的急性结肠炎，发现P5和P10代无血清培养的hMSC‑DP具有较强的治疗能力，提示无血清培养的hMSC‑DP具有运用于免疫疾病治疗的强大潜力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种干细胞的制备方法及其应用。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)已在临床中广泛用于治疗各种疾病^[1]。MSC可以从多种组织中分离出来，例如骨髓，脐带组织，脂肪组织和牙髓^[2]。国际细胞治疗学会(ISCT)在2006年建立了MSC应用的最低标准^[3]。然而，尚未建立用于对来自特定组织的MSC进行质量评估的标准。

自从发现hMSC-DP^[4,5]以来，它们的生理和功能特性已得到广泛研究^[6]。hMSC-DP的优异的增殖能力，成牙本质/成骨能力和免疫调节能力已得到广泛认可^[6-8]。近年来，hMSC-DP已在临床前和临床研究中用于组织再生和免疫疗法^[7,9-13]。MSC的质量和效力对于确保其治疗效果至关重要^[14]。然而，由ISCT制定的MSC最低标准可能无法为hMSC-DP的临床使用提供足够的指导^[3]。

先前的研究表明，使用胎牛血清(FBS)培养的MSC可能会导致一些伦理和免疫反应问题^[15-17]。FBS批次之间明显的质量差异也限制了MSC的大规模生产。因此，有必要将无血清(SF)培养的MSC用于将来的临床实践。FBS替代品，包括人血小板裂解物和化学成分确定的SF培养基，似乎为hMSC-DP的培养扩增提供了足够的营养支持，并保持了其组织再生的多能性^[18-20]。但是，尚不完全了解SF培养基对hMSC-DP的详细培养作用和对其细胞功能的影响。

发明内容

一些实施方案中，本发明提供了牙髓干细胞在制备T细胞活性调节剂中的应用，所述牙髓间充质干细胞为使用无血清培养基培养获得的。

一些实施方案中，所述牙髓间充质干细胞的代数小于或等于第15代。

一些实施方案中，所述牙髓间充质干细胞的代数小于或等于第10代。

一些实施方案中，所述牙髓间充质干细胞的代数小于或等于第5代。

一些实施方案中，所述牙髓间充质干细胞包括DPSC和SHED。

一些实施方案中，所述的T细胞活性调节剂为诱导T细胞凋亡的调节剂。

一些实施方案中，所述牙髓干细胞用于治疗免疫性疾病。

一些实施方案中，所述牙髓干细胞用于治疗肠炎。

一些实施方案中，本发明提供了牙髓干细胞在制备治疗免疫性疾病的药物中的应用，所述牙髓间充质干细胞为使用无血清培养基培养获得的。

一些实施方案中，本发明提供了一种制备干细胞的方法，所述干细胞使用的培养基为无血清培养基，所述干细胞为牙髓间充质干细胞，所述方法获得的干细胞用于调节T细胞活性。

一些实施方案中，所述方法获得的干细胞用于诱导T细胞的凋亡。

一些实施方案中，所述方法获得的干细胞用于治疗免疫性疾病。

一些实施方案中，所述方法获得的干细胞用于治疗肠炎。