[发明专利]一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体、制备方法及应用

权利要求书

1.一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体，其特征在于：超分子蛋白载体通过纯化的FTn与末端修饰的多臂PEG进行反应构建得到。

2.根据权利要求1所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体，其特征在于：超分子蛋白载体通过纯化的FTn上的氨基酸侧链官能团与末端修饰反应官能团的多臂PEG进行共价连接反应构建得到。

3.根据权利要求2所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体，其特征在于：FTn上的氨基酸侧链官能团为氨基、羧基、巯基官能团的一种或多种，优选的，FTn上的氨基酸侧链官能团为氨基；PEG末端修饰的反应官能团为氨基、羧基、巯基、马来酰亚氨基、琥珀酰亚胺羧甲基酯、丙烯酸酯、乙烯基砜官能团的一种或多种；优选的，PEG末端修饰的反应官能团为羧基、马来酰亚氨基、琥珀酰亚胺羧甲基酯官能团中的一种或多种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体，其特征在于：超分子蛋白载体的长度为20-100nm，优选的，超分子蛋白载体的长度为20-80nm。

5.根据权利要求1所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体的制备方法，其特征在于：末端修饰反应官能团的多臂PEG为二臂PEG-琥珀酰亚胺羧甲基酯、三臂PEG-琥珀酰亚胺羧甲基酯、四臂PEG-琥珀酰亚胺羧甲基酯中的一种。

6.如权利要求1-5任意一项所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)人重链铁蛋白纳米笼的制备：重组重链铁蛋白大肠杆菌原核表达菌株，用IPTG对FTn原核表达菌株进行诱导表达，诱导表达完成后去除部分杂蛋白，用色谱柱进行分离纯化即得人重链铁蛋白纳米笼；

(2)铁蛋白修饰的超分子蛋白载体的制备：将末端修饰反应官能团的PEG粉末溶解于DMSO中，将步骤(1)中纯化的人重链铁蛋白纳米笼溶于PBS溶液中并加入NaOH调节PH至7.5-8.5，之后将末端修饰反应官能团的PEG溶液与人重链铁蛋白纳米笼溶液进行混合，室温反应3-4小时后得到PEG修饰铁蛋白的超分子蛋白载体；

(3)铁蛋白修饰的超分子蛋白载体纯化：将步骤(2)中制备得到的铁蛋白修饰的超分子蛋白载体进行纯化后得到所需分子量的铁蛋白修饰的超分子蛋白载体。

7.根据权利要求6所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，重组重链铁蛋白大肠杆菌原核表达菌株的菌液OD₆₀₀为0.6-0.8，用IPTG诱导表达3-5小时，将上清液超滤浓缩后经AKTA层析系统进行分离纯化即得人重链铁蛋白纳米笼。

8.根据权利要求6所述的一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，铁蛋白与末端修饰反应官能团的多臂PEG反应，末端修饰的多臂PEG与人重链铁蛋白纳米笼的摩尔比为10-100：1；优选的，末端修饰反应官能团的多臂PEG与人重链铁蛋白纳米笼的摩尔比为10-80：1；优选的，末端修饰反应官能团的多臂PEG与人重链铁蛋白纳米笼的摩尔比为15：1。

9.一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体在以转铁蛋白受体高表达的癌细胞以及在治疗以转铁蛋白受体高表达的肿瘤中的应用。

10.一种多臂PEG修饰的铁蛋白超分子蛋白载体的混合物在非变性蛋白电泳中作为分子量标准中的应用。