[发明专利]一种金黄色葡萄球菌快速检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，它包括：Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针、万古霉素溶液、胶体金溶液，磁铁。它通过Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针实现金黄色葡萄球菌的富集和分离，利用万古霉素诱导胶体金冻融后发生聚集变化，根据胶体的聚集颜色变化，对金黄色葡萄球菌进行定量检测，定量检测时变异系数小，线性范围广，方法灵敏度高，检测定量限为2.1 CFU/mL，另外本发明成本较低，操作简单，易于实施，缩短了检测时间，稳定性好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种金黄色葡萄球菌快速检测方法及试剂盒。

背景技术

食源性致病菌作为食品中生物性污染物对人类健康构成重大威胁。常见的食源性致病菌为单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes），大肠杆菌O157：H7（Escherichia coil），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），肠炎沙门氏菌（Salmonella）等，它们是引起人们住院最常见的原因，程度较为严重的可引起死亡。金黄色葡萄球菌简称金葡菌，隶属葡萄球菌属，是一种十分常见的食源性致病菌。金葡菌抵抗不良生存环境的能力很强，广泛存在于自然界，如水、空气、尘埃、人和动物的排泄物中，极易导致食品的污染，引发多种疾病，如肺炎、假膜性结肠炎、心包炎甚至败血症等。金葡菌在特定条件下产生的肠毒素是引导食物中毒主要致病因子之一。 肠毒素对肠道破坏极大，可以引发恶心、反复呕吐、腹痛、腹泻、休克等急性中毒症状，严重可导致循环衰竭。由于金黄色葡萄球菌的生长不需要十分丰富的营养，抵抗不良环境能力和耐盐性较强，可以对各种食品构成污染。目前，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中占较大比例。我国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例约占食物中毒病例总数的20% ~25%，美国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒数量占细菌性食物中毒总量的33%，加拿大占到45%。目前，食源性致病菌的检测方法主要有传统分离培养法、分子生物学检测方法、免疫学方法、生物传感技术等，虽然这些方法能实现对食源性致病菌的检测，但仍存在各自的缺点。金黄色葡萄球菌指标是GB4789系列食品微生物检验中最基本、最常见的检测项目。传统的培养法对金葡菌的测量方法费时费力，需要大量人工操作。如国标GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》，该方法需要预增菌、增菌、培养、生化鉴定等一系列步骤，花费时间在60小时以上，还需要BPW、TTB、SC增菌液，XLD，BS，HE，显色培养基，后续生化鉴定也需要大量的试剂。培养法费时费力。PCR技术操作复杂、成本高以及需要操作技术较高的工作人员；酶联免疫法价格昂贵，并且其活性容易受到温度、pH等环境因素的影响。因此，迫切需要开发一种操作简单、易于实施、快速和灵敏度高的检测方法。