[发明专利]一种等温环介导扩增方法及其应用

权利要求书

1.一种等温环介导扩增方法，包括步骤：针对靶基因的6个不同区域设计特异性引物，所述特异性引物可以在恒温条件下顺利与靶基因模板结合，发生链置换扩增反应；其特征在于：

所述特异性引物包括4条混合式引物，所述4条混合式引物如下:

FIP引物：由F1c区域和F2区域组成，F2区域与靶基因端的F2c区域互补，F1c区域与靶基因的F1c区域序列相同；

BIP引物：由B1c区域和B2区域组成，B2区域与靶基因的B2c区域互补，B1c区域与靶基因的B1c区域序列相同；

F3P引物：由F1c区域和F3区域组成，F3区域与靶基因的F3c区域互补，F1c区域与靶基因的Flc区域序列相同；

B3P引物：由B3区域和B1C区域组成，B3区域与靶基因的B3c区域互补，B1C区域与靶基因的B1c区域序列相同。

2.如权利要求1所述的等温环介导扩增方法，其特征在于：所述特异性引物还包括2条非混合式引物，所述2条非混合式引物为环引物LF及环引物LB。

3.如权利要求1所述的等温环介导扩增方法，其特征在于：所述特异性引物组合时的摩尔比为：FIP:B3P:LF＝4:1:1。

4.一种如权利要求1或2或3所述的等温环介导扩增方法在非疾病诊断目的的病原微生物检测中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述病原微生物为H1N1流感病毒，所述特异性引物的序列为：

H1N1-F3P：TCCTGCAAAGACACTTTCCAGTGGTCGAAACGTACGTTCTT；

H1N1-B3P：TGAGGCTCTCATGGAATGGCTAGTCTACGCTGCAGTCCTC；

H1N1-FIP：TCCTGCAAAGACACTTTCCAGT-CTATCATCCCGTCAGGCC；

H1N1-BIP：TGAGGCTCTCATGGAATGGCTA-GAGCGTGAACACAAATCCT；

H1N1-LF：CTCCCTTCTTGATCCC；

H1N1-LB：AGTGGTACCGAGATATGCA。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：应用于非疾病诊断目的的H1N1病毒的检测时，检测方法包括以下步骤：

S1、设计并合成如权利要求5所述的引物，配制引物混合液；

S2、配制LAMP反应体系，利用步骤S1得到的引物混合液将待测样本中的DNA模板进行环介导等温扩增反应，观察反应体系的颜色变化或者进行实时荧光检测。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述反应体系还包括：Bst DNA聚合酶和酚红指示剂。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于：步骤S1中，引物混合液中，各引物的浓度为：H1N1-F3P：4μMol/L，H1N1-B3P：4μMol/L，H1N1-FIP：16μMol/L，H1N1-BIP：16μMol/L，H1N1-LF：4μMol/L，H1N1-LB：4μMol/L。

9.一种用于检测H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含如权利要求5所述的引物的组合。

10.根据权利要求9所述用于检测H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于：还包含缓冲液和颜色指示剂。