[发明专利]一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫的方法

权利要求书

1.一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）菌种活化

将绿僵菌接种到SDAY斜面培养基中，温度20-35℃、培养8-16天，得到斜面菌种；

（2）扩大培养

将所述斜面菌种接种到SDY液体培养基中，每支斜面菌种接种到300-1000mL的液体培养基，温度20-30℃、转速110-250rpm/分钟条件下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积重量比（V/W）接种到小麦固体培养基、或大米固体培养基、或麦麸固体培养基、或谷糠固体培养基中，20-35℃培养培养8-16天，得到扩大培养物；

（3）收集孢子

将扩大培养物在-50-40℃干燥，用收孢机收取孢子；用含0.05%吐温的水将孢子配制成浓度1×10⁶-1×10⁹个孢子/mL的绿僵菌溶液；

（4）化学农药杀虫和绿僵菌联合处理

在害虫爆发的农田，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待18-60h；在植物上喷洒所述绿僵菌溶液，喷洒量为每hm²喷洒30-600L；

喷洒化学农药一周，农残降低80%及以上；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低90%及以上。

2.一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）菌种活化

将绿僵菌接种到PDA斜面培养基中，温度20-35℃、培养8-16天，得到斜面菌种；

（2）扩大培养

将所述斜面菌种接种到PDB培养基中，每支斜面菌种接种到300-1000mL的液体培养基，温度20-30℃、转速110-250rpm/分钟条件下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积比（V/V）接种到SDY或PDB液体培养基中，于温度20-30℃、在转速为110-250rpm/分钟的摇床中或在通气量为体积比1:1（v/v）的发酵罐中培养5-12天，得到液体培养物；

（3）化学农药杀虫和绿僵菌联合处理

在害虫爆发的农田，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待18-60h时；将所述液体培养物匀浆稀释50-500倍均匀喷洒到喷洒过化学农药的植物上，喷洒量为50-800L/hm²；

喷洒化学农药一周，农残降低80%及以上；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低90%及以上。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于：所述的绿僵菌（Metarhizium）是金龟子绿僵菌（ M. anisopliae）、罗伯茨绿僵菌 (M. robberstii)、蝗绿僵菌（M. acridum）或黄绿绿僵菌（Metarhium flavoviride）中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于：步骤（1）中，所述SDAY培养基配方为：40g葡萄糖、10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g琼脂，加水至1000mL。

5.根据权利要求1所述的一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于：步骤（1）中，所述PDA培养基配方为：200g去皮马铃薯、20g葡萄糖和15g琼脂，加水至1000mL。

6.根据权利要求1所述的一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于：步骤（2）中，按重量比1：0.2-1.0将小麦、或大米、或麦麸、或谷糠加水浸泡0.5小时，常规高压灭菌，得到小麦固体培养基、或大米固体培养基、或麦麸固体培养基、或谷糠固体培养基。

7.根据权利要求2所述的一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于：步骤（1）中，所述SDY液体培养基配方为：葡萄糖40g、酵母浸粉10g、蛋白胨10g加水至1000mL。

8.根据权利要求2所述的一种利用绿僵菌降低农药残留和联合杀虫方法，其特征在于：步骤（1）中，所述PDB培养基配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖20.0g加水至1000mL。