[发明专利]杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用，杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO：C2020217；从杂交瘤细胞株中克隆得到了抗人OPRM1单克隆抗体轻、重链可变区基因。所得重链和轻链可变区基因可编码正确的小鼠抗体可变区，具有特征性的抗体高变区序列。基于上述已克隆到的抗人OPRM1单克隆抗体轻、重链可变区基因，可以采用基因工程方法，构建和表达多种小分子基因工程抗体，如单链抗体、嵌合抗体、Fab抗体等，以便用于制备靶向OPRM1的诊断或治疗性药物，比如肿瘤和/或药物成瘾。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用。

背景技术

恶性肿瘤目前仍是我国重大公共卫生问题和首要致死原因。原发性肝癌俗称“癌中之王”，恶性进展快，治疗难度大，病死率高，是一种非常凶险的疾病，最新统计显示，肝癌在世界范围内肿瘤致死率排名第三位，在我国肿瘤致死率排名第二位，对居民生命健康危害极大。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是原发性肝癌中最主要的、最普遍的一种，其发病凶险，进展速度快，平均自然生存时间仅为3至6个月。临床上对肝癌病人的治疗仍无明显突破，因此研究肝癌的诊断和治疗具有重要的意义。

自1975年和Milstein创建B淋巴细胞杂交瘤技术以来，各种单克隆抗体(McAb)相继出现，它们在疾病诊治的基础研究和临床应用方面发挥了积极的作用,其中肝癌单抗的研制更是为这种难治性肿瘤带来了新的希望。近二十年，关于肝癌单抗的研究大多为甲胎蛋白和抗生长因子单抗。在肝癌单抗的制备方面,多采用传统免疫方法，即以可溶性物质或肝癌培养细胞为免疫原，由于肿瘤抗原的变异或部分丢失，因而该方法难以获得高亲和性、高特异性的肝癌单抗。用肿瘤特异性高表达抗原免疫动物制备单抗已有成功报道。该法虽然制备抗原麻烦，但能较好地筛选到目的靶点的单抗，不失为治疗性单抗制备的好方法。

阿片受体在脑中分布广泛，见诸于脊髓、外周感觉神经和自主神经中。经典的阿片受体是七次跨膜G蛋白偶联受体(GPCR)，主要包括μ阿片受体(Mu opioidreceptor，MOR，亦称OPRM1，OPRM，MOR-1等)、δ阿片受体(Delta opioid receptor，DOR)和κ阿片受体(Kappaopoid receptor，KOR)三类；其中，μ阿片受体OPRM1是目前报道的参与镇痛和介导药物成瘾相关的受体。目前这些经典受体类型的基因已经被克隆，结构生物学验证该类受体均为7次跨膜受体，可激活百日咳毒素不敏感G_αi/o家族的G蛋白，包括G_αz。证据表明μ、δ和k阿片受体存在不同亚型，但观察到的功能差异和药理学差异的分子基础尚不清楚。内源性阿片系统在调节疼痛感知方面起到功能性作用，因此阿片受体激动剂是有效的镇痛药。在NCBI的Aceview的数据库中，人源阿片受体μ受体OPRM由400个氨基酸残基组成，与大鼠的该受体同源性可达95％。人的μ受体至少存在19种RNA剪辑转录本(Transcript variants)并预测(Predicted in Aceview)出编码18种不同的剪切异构体，这些剪切异构体的功能大都不明确。

阿片受体OPRM1属于Gi/o型GPCR中的一员，而其他Gi/o型GPCR如A2肾上腺素、腺苷A1等在激动剂慢性作用后则无依赖耐受现象出现。为了解释这一现象，用阿片受体OPRM1的胞内片段如C-末端筛选直接与阿片受体相互作用的特异性蛋白。其中与μ阿片受体的相互作用蛋白研究最多的，有钙调蛋白(Calmodulin)、丝蛋白A(Filamin A)、Periplakin、PKCI、RGS4和TRPV1等。这些蛋白与阿片受体的相互作用使得受体激活后效应发生了改变，进一步提示阿片受体激活后并非完全局限于与公认的G蛋白偶联。也有报道以阿片受体C-端为诱饵筛选吗啡依赖大鼠的脑cDNA文库得到A20结合的核因子抑制蛋白1(ABIN1)，显示ABIN1蛋白对μ阿片受体与配体结合的亲和力及激动活性能够产生一定的影响，提示可能有更多或者更加特异性的蛋白参与了阿片受体后的调节，特别是针对代谢通路的改变研究也是重要的方面。