[发明专利]永生化狗干细胞或其用途

说明书

本发明涉及永生化狗干细胞或其用途，具体地，涉及通过向狗干细胞转导包含人乳头瘤病毒的E6及E7基因的慢病毒载体并分化来得到的永生化狗干细胞及其用途。具体地，本发明的永生化狗干细胞通过向狗干细胞转导人乳头瘤病毒的E6及E7基因，可以在不反复采集干细胞的情况下，获得具有相同特性及功效的狗干细胞，上述永生化狗干细胞及作为上述干细胞的培养液的富含外泌体的培养液(ERCM)表现出抑制过敏反应引起的全身性休克反应、缓解特应性皮炎引起的瘙痒及抑制组氨的增加、改善类风湿关节炎的临床症状等优秀的效果，可以有效用于包括这些疾病在内的多种炎症性疾病的治疗中。

技术领域

本发明涉及永生化狗干细胞或其用途，具体地，涉及通过向狗干 细胞转导包含人乳头瘤病毒的E6及E7基因的慢病毒载体并分化来得 到的永生化狗干细胞及其用途。

背景技术

近来，皮肤疾病在城市人群和宠物中的发病急剧增加。由此，不 仅是感染性皮肤病，由微尘等环境污染物质和干燥的气候、花粉、居 家地毯中栖息的螨虫等直接诱发接触性皮肤疾病，或者暴露于诱发免 疫过敏反应的多种过敏原(allergen)的倾向在增加。尤其是宠物，由 于在外面的土或草坪上打滚、相互追逐打闹、暴露于垃圾桶等环境污 染物质的机会多，因此经常发生皮肤炎。而且在宠物中，犬类的寿命 约为10年～15年，到了10岁以上的时候，会因感染病、皮肤炎、关 节炎、呼吸系统疾病等之类的炎症疾病而受痛苦。

关节炎分为退行性骨关节炎(osteoarthritis，OA)和类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis，RA)。骨关节炎是随着年龄的增长，关节软骨由 于负荷而退行性地磨损，从而使骨表面相互碰撞而诱发疼痛，骨头向 侧面生长而形成骨赘(osteophyte)而诱发运动障碍的疾病。相反地， 类风湿关节炎是炎症细胞向关节腔浸润，使炎症性滑膜(synovialmembrane)增生，形成关节翳(pannus)，从而诱发严重的肿胀和疼痛， 因关节头的变形及融合而诱发运动障碍。这样的炎症反应会扩大为侵 犯关节以外的其他器官的全身性慢性炎症性疾病。类风湿关节炎的病 因尚不明确，但据报道，类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病，遗传 及环境因素导致的免疫细胞的偏向性分化是其病因。

因此，为了治疗特应性皮炎或类风湿关节炎之类的炎症性疾病， 广泛使用作为一氧化氮合酶(NOS，nitric oxide synthase)抑制剂的皮 质类固醇(corticosteroids)和作为环氧化酶2(COX-II)抑制剂的非 甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatorydrug，NSAID)。但是，长 期使用皮质类固醇不仅效果会下降，还会引起抑制免疫功能的严重副 作用，而非甾体抗炎药虽然暂时缓解疼痛和炎症，但在根本性的治疗 中作用有限，还会引起胃溃疡等二次副作用。

另一方面，近来随着干细胞(stem cell)能够用于多种疾病的治疗 的潜在功能被认知，利用干细胞的多种治疗剂的开发正如火如荼地进 行着。然而，利用干细胞的细胞治疗剂具有须通过从患者身上反复采 集来增殖的难点。因此，若可以建立通过将一次采集的干细胞永生化 来继续使用的干细胞株(stem cell line)，就不用反复采集干细胞而节省手术费用，可以持续地保持干细胞的特性，可以解决反复培养时干细 胞的增殖能力下降的问题。

用于细胞移植的干细胞大体分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎 干细胞起源于内细胞(inner cell)，可以分化为体内的所有细胞，但能 够发展为肿瘤细胞，因此若要用于治疗剂还有很多技术问题要解决。 相反，成体干细胞可以在成熟的个体中获得，具有可以无肿瘤风险地 使用的优点。成体干细胞可以从骨髓、脐带血、脂肪组织等处获得。

发明内容

本发明的目的在于，提供永生化狗干细胞或上述狗干细胞的培养 液。

本发明的另一目的在于，提供永生化狗干细胞或上述狗干细胞的 培养液的用途。

为了实现上述目的，本发明提供转导有人乳头瘤病毒(HPV)的 E6及E7基因的永生化狗干细胞。