[发明专利]一种液晶型适配体生物传感器及其制备方法和在检测前列腺特异性抗原中的应用

权利要求书

1.一种液晶型适配体生物传感器，其特征在于，所述生物传感器包括依次排列的上玻片、铜载网和下玻片；所述上玻片和下玻片部分或全部重合，且所述铜载网置于所述上玻片和下玻片之间；其中：

所述下玻片的组装膜基底经DMOAP和APTES混合液处理，再用二醛化合物的一个醛基对APTES膜氨基进行醛基化修饰、另一醛基固定5′端修饰氨基PSA适配体；

所述铜载网置于所述下玻片固载所述氨基PSA适配体的检测物面中心，并且所述铜载网上布满5CB液晶分子；

所述上玻片经DMOAP处理以诱导所述5CB液晶分子的垂直取向。

2.权利要求1所述液晶型适配体生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)上玻片预处理：用DMOAP修饰经表面洁净化处理的上玻片，将修饰后的上玻片洗净于室温下浸泡在体积百分比为0.35％的DMOAP水溶液中，时间为30min；然后，用超纯水冲洗、N₂吹干，110℃恒温干燥1h，得到固定DMOAP膜的上玻片备用；

(2)下玻片预处理：用DMOAP和APTES混合液修饰经表面洁净化处理的下玻片，得到下玻片自组装DMOAP和APTES混合膜，清洗后置于体积百分比为0.3％DMOAP和0.3％APTES的无水乙醇混合液中，80℃浸泡2h，然后用无水乙醇、超纯水依次冲洗，N₂吹干，110℃恒温干燥1h；再用二醛化合物的一个醛基对APTES膜氨基进行醛基化修饰、另一醛基固定5′端修饰氨基PSA适配体；

(3)铜载网预处理：铜载网置于步骤(2)得到的下玻片固载所述PSA适配体的检测物面中心，将5CB液晶分子转移并布满整个所述铜载网；

(4)将步骤(1)和步骤(2)中预处理得到的上玻片和下玻片叠合在一起，且将步骤(3)中预处理得到铜载网置于它们之间，获得包括预处理后的上玻片、铜载网和下玻片依次排列组成的所述生物传感器。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述表面洁净化处理为：将上玻片或下玻片用新配置的Piranha溶液于80℃浸泡2h，洗净后在无水乙醇中超声30min，去除所述上玻片和下玻片表面的有机物并使玻片表面羟基化，然后用大量超纯水冲洗，去除残留酸液，N₂吹干，110℃恒温干燥3～5h后，取出防尘备用。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述下玻片预处理过程为：

用APTES-GA/DMOAP修饰下玻片，得到DMOAP和APTES复合膜基底的下玻片，然后置于体积百分比为0.1％的GA水溶液中，室温下浸泡45min，使下玻片表面APTES醛基化，取出后用超纯水冲洗，N₂吹干，得到修饰了APTES-GA/DMOAP基底的下玻片备用。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述下玻片预处理过程为：

用APTES-GA-Apt/DMOAP修饰下玻片，将200μL浓度为100pmol/L适配体Apt的Tris-HCl溶液滴加到所述修饰了APTES-GA/DMOAP的下玻片膜基底表面，37℃下孵育12h，用体积比为0.005％、pH值为7.0的十二烷基硫酸钠清洗液和超纯水冲洗，去除下玻片上未固定的多余适配体，小流量N₂吹干备用。

6.根据权利要求2至6任一所述的制备方法，其特征在于，还包括所述下玻片上未反应的醛基活性位点封闭：在室温下用80mmol/L甘氨酸溶液浸泡所述预处理的下玻片1h，用超纯水冲洗，N₂吹干，去除非特异性吸附物质的干扰。

7.根据权利要求2至6任一所述的制备方法，其特征在于，所述氨基PSA适配体的碱基序列为：5′-5AmMC6-AATTAAAGCTCGCCATCAAATAGC-3′；其中，5AmMC6是指在适配体5′端修饰氨基。