[发明专利]猪ASMT基因及其特异性引物对和检测试剂盒

说明书

本发明涉及分离的猪ASMT基因以及相应的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及针对猪ASMT基因的特异性引物对和检测试剂盒。本发明明确了猪ASMT基因序列，为该基因相关的生物合成路径以及生理和病理方面的研究提供新的参考。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及分离的猪ASMT基因以及相应的表达载体和宿主细胞，还涉及针对猪ASMT基因的特异性引物对和检测试剂盒。

背景技术

褪黑素(Melatonin，MT，N-乙酰基-5-甲氧基色胺)也被称为“脑白金”，主要是由哺乳动物松果体、卵巢等器官合成分泌的一种重要的吲哚类活性小分子物质，其广泛分布于动物多个组织中。褪黑素是一种十分重要的内分泌激素，其合成受到光照的抑制，呈现昼低夜高的节律振荡，因而也被称为“黑暗荷尔蒙”。褪黑素具有多种生理学和药理学功能，比如：改善睡眠，调节生物节律，缓解应激，调节免疫系统，增强免疫力，抗肿瘤，抗衰老等。褪黑素及其代谢产物都是重要的广谱抗氧化剂，能够清除动物体内、外的氧基自由基(ROS)、高活性的氮基自由基(RNS)等，还能够激活细胞内抗氧化酶基因的表达，进一步发挥抗氧化功能。另外，褪黑素能够保护细胞DNA的稳定性，减少脂质的损伤，维持线粒体功能，促进抗凋亡基因的表达等。褪黑素也是一种关键的生殖激素，在动物繁殖活动中直接或间接调控生殖激素的分泌、卵泡发育、胚胎发育及附植等，也参与了季节性发情动物发情周期的调控。

在哺乳动物体内，褪黑素合成的最初来源物质是L-tryptophan(色氨酸)。L-tryptophan经过TPH(tryptophane hydroxylase，色氨酸羟化酶)催化的羟化反应生成5-羟色氨酸(5-Hydroxytryptophan，5-HTP)，再经过AAAD(L-aromatic amino aciddecarboxylase，L-芳香氨基酸脱羧酶)脱羧反应后变为5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine，5-HT)，也称血清素(Serotonin)。5-羟色胺在AANAT(Arylalkylamine-N-Acetyltransferase，芳烷基胺N-乙酰转移酶)的作用下生成N-乙酰-5-羟色胺(N-Acetyl-Serotonin，NAS)。最后在ASMT(acetylserotonin O-methyltransferase，乙酰-5-羟色胺-氧-甲基转移酶)的催化作用下发生甲基化进而生成最终的褪黑素。

我国是世界上生猪存栏量最大的国家，养猪业的健康发展和猪肉的稳定供应与国计民生息息相关，实验模型猪的不断开发也大大促进了我国生物医学和药物的研究进展。然而，对于具有重要食用和医用价值的猪来说，发明人发现NCBI数据库中并没有猪ASMT基因，我们推测猪ASMT基因可能类似于小鼠ASMT，复杂区域的高突变率可能导致了猪ASMT基因至今尚未被成功挖掘，这也是让猪褪黑素生物合成路径相关研究停滞不前的主要原因。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中猪ASMT基因信息混乱不清楚的问题，运用生物信息学方法，重新定位并且明确了猪的ASMT基因，为该基因进一步的生物学研究和应用提供新的参考。

具体技术方案如下：

第一方面，本发明提供分离的猪ASMT基因，该基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

第二方面，本发明提供猪ASMT基因编码的蛋白质，其具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

第三方面，本发明提供表达猪ASMT基因的表达载体，其包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

第四方面，本发明提供表达猪ASMT基因的宿主细胞，所述宿主细胞中外源转入了第三方面所述的表达载体。所述宿主细胞可以是大肠杆菌，也可以是真核细胞。

第五方面，本发明提供所述分离的猪ASMT基因、猪ASMT基因编码的蛋白质、所述表达载体或所述宿主细胞在褪黑素和/或其代谢产物相关的生理或病理研究中的应用。