[发明专利]检测番茄环斑病毒的引物组合物、试剂盒及应用

权利要求书

1.检测或辅助检测番茄环斑病毒的组合物，其特征在于，所述组合物由引物ToBF1、引物ToBR1、引物ToDR1、引物ToMBR1和引物ToCPF1组成；所述引物ToBF1的核苷酸序列如SEQID No.1所示；所述引物ToBR1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述引物ToDR1的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述引物ToMBR1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述引物ToCPF1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述引物ToDR1的5’端标记FAM，引物ToMBR1的5’端标记生物素。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述引物ToBF1、引物ToBR1、引物ToDR1、引物ToMBR1和引物ToCPF1的摩尔比为：1：1：3：3：5。

4.检测或辅助检测番茄环斑病毒的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包含权利要求1-3中任一所述的组合物。

5.检测或辅助检测番茄环斑病毒的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

采用权利要求1-3任一所述的组合物或权利要求4所述的试剂或试剂盒对待测样品进行交叉引物等温扩增，根据扩增产物确定待测样品是否含有番茄环斑病毒或是否感染番茄环斑病毒。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述交叉引物等温扩增中，所述引物ToBF1和引物ToBR1在反应体系中的含量均为0.2μmol/L；所述引物ToDR1和引物ToMBR1在反应体系中的含量均为0.6μmol/L；所述引物ToCPF1在反应体系中的含量为1μmol/L。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述交叉引物等温扩增为实时荧光交叉引物等温扩增。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述根据扩增产物确定待测样品是否含有番茄环斑病毒或是否感染番茄环斑病毒的方法为：根据扩增曲线确定待测样品是否含有番茄环斑病毒，如果扩增曲线为非S型扩增曲线，确定待测样品中不含有番茄环斑病毒或没有感染番茄环斑病毒，确定待测样品中疑似不含有番茄环斑病毒或疑似没有感染番茄环斑病毒；如果扩增曲线为S型扩增曲线，确定待测样品中含有番茄环斑病毒或感染番茄环斑病毒，或确定待测样品中疑似含有番茄环斑病毒或疑似感染番茄环斑病毒。

9.根据权利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于，所述扩增产物用核酸试纸条检测，所述根据扩增产物确定待测样品是否含有番茄环斑病毒或是否感染番茄环斑病毒的方法为：如果所述核酸试纸条出现两条条带，一条位于质控区内，一条位于检测区，确定待测样品中含有番茄环斑病毒或感染番茄环斑病毒，或确定待测样品中疑似含有番茄环斑病毒或疑似感染番茄环斑病毒；如果所述核酸试纸条只出现一条条带，位于质控区内，确定待测样品中不含有番茄环斑病毒或没有感染番茄环斑病毒，或确定待测样品中疑似不含有番茄环斑病毒或疑似没有感染番茄环斑病毒。

10.权利要求1-3所述的组合物在制备用于番茄环斑病毒的检测或辅助检测的产品中的应用，和/或，权利要求4或5所述的试剂或试剂盒在番茄环斑病毒的检测或辅助检测中的应用。