[发明专利]一株猪轮状病毒株及其制备的灭活疫苗和用途

权利要求书

1.一株分离的猪A型轮状病毒(Group A rotavirus)株，其特征在于，所述病毒株保藏编号为CCTCC NO. V202132。

2.权利要求1所述的猪轮状病毒株在制备猪轮状病毒诊断试剂中的用途；

所述用途为制备猪轮状病毒株与致病性病原体、抗原、抗体以及核酸检测相关的试剂。

3.权利要求1所述的猪轮状病毒株在制备预防和/或治疗猪轮状病毒感染的疫苗中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述疫苗中还包括药学上可接受佐剂。

5.一种猪轮状病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将包含权利要求1所述病毒株的病毒液与灭活剂混合，灭活后再与佐剂混合，即得。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述病毒液的制备方法包括：将保藏编号为CCTCC NO.V202132的轮状病毒株与宿主细胞共培养，冻融宿主细胞，离心收获上清，即得病毒液。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，病毒株在与宿主细胞共培养前先用胰蛋白酶处理；

所述宿主细胞为MA-104细胞；

所述共培养步骤为：在温度为25~39℃、3~7%CO₂条件下，将病毒液接种至经清洗液清洗过的单层培养的宿主细胞上，孵育0.5~1.5 h后弃悬液，加入维持液，在同样的培养条件下孵育，至细胞病变（CPE）占比70~90%时，进行下一步冻融操作。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述胰蛋白酶为TPCK胰酶；所述培养条件为：温度为37℃、5%CO₂，孵育1h后弃悬液；至细胞病变（CPE）占比80%时，进行下一步冻融操作。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述清洗液为Hank's液，维持液为含1%双抗的DMEM。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述灭活剂选自β-丙内酯。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述β-丙内酯的质量体积分数不高于0.05%；

所述灭活的条件为：温度为25~39℃、灭活时间4~24 h。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述β-丙内酯的质量体积分数为0.025%；

所述灭活的条件为：温度37℃、灭活时间12 h。

13.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，TCID₅₀=10^5.8 /100μL的灭活后的病毒液：佐剂的体积比1:1；

与佐剂混合的反应条件为：温度28~35℃，200~400 r/min搅拌3~8 min。