[发明专利]一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，所述试剂盒由20支PCR反应管、300μl PCR反应混合物、2.0g琼脂糖、100μl溴化乙锭10μg/μl、0.25％溴酚蓝点样缓冲液100μl、5μl Taq酶(5U/μl)组成，其中PCR反应混合物包含引物序列Primer:F 5’‑CTGGCATAGGACGGAGTA‑3’，R 5’‑CGCAACATTCGCATCTAC‑3’；本发明提供的试剂盒所含引物序列高度保守，可以检测不同来源，突变的非洲猪瘟病毒，可以更好的应对非洲猪瘟病毒突变。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪痘病毒(African swine fevervirus, ASFV)感染引起的，巧猪、豪猪、野猪及家养猪易感，猪一旦感染后，主要临床症状表现为高热、食欲废绝、皮肤发绀，剖检后会发现淋巴结、肾、胃肠黏膜等出血，毒力强 的毒株感染猪后，造成的病死率可高达100％，虽然无该病毒感染人的报道，但发生该 病后对养猪业带来极大的危害，动物产品的销售、贸易等均受到严重限制，因此世界动 物卫生组织将其列为法定上报的动物疫病，在我国动物病原微生物名录中，也被列为一 类动物疾病。

ASFV二十面体对称，病毒粒子直径200nm，结构呈同心球状，最中央区域为核质体，其直径约80nm，由病毒基因组、完成基因早期转录所必需的酶以及一些DNA结合 蛋白组成，如p150、p37、p34、p14以及p14.5、p10，核质体外围是一些蛋白组成的核 衣壳，壳粒是其基本结构单位，共有1982-2172个。

1921年，ASF最早在肯尼亚出现，随后的几十年里该病发生于撒哈拉沙漠周边一些国家，1957年非洲大陆外的葡萄牙国家首次爆发该病，葡萄牙的这次ASF发生后很 快就被控制和消灭掉，到了1960年，里斯本附近地区又爆发了ASF，从该病爆发开始 到1995年，ASFV在伊比利亚半岛(西班牙和葡萄牙)的许多地区蔓延，上世纪70年 代末到80年代中后期，ASFV迅速扩散到世界其他的地方，其中影响较大的是另外一 些欧洲国家(如意大利、法国、荷兰、比利时等)和美洲的一些国家，多米尼加共和国 和巴西尤其严重。通过追根溯源发现，给健康猪饲喂污染ASFV的机场和港口的泔水， 是造成ASFV从疫区国家传播到无疫病国家的主要原因。一旦猪群感染，发病猪及猪肉 制品立马成为新的病毒传染源。西班牙ASFV的流行病学资料显示，控制措施如果能落 实到位，ASF还是可以清除的，然而在意大利的撒丁岛和非洲大陆，特别是非洲东南部 地区，该病毒仍持续存在。上世纪90年代到本世纪初，ASF的流行病学和分布情况发 生了改变，开始进入其他的一些地区，包括一些西非国家；1996年科特迪瓦发生ASF， 1997年尼日利亚和多哥发生ASF，1999年加纳发生ASF，2003年布基纳法索发生ASF，2010年乍得发生ASF等；在西非发生的同时，马达加斯加和毛里求斯这样的岛屿国家 也出现了ASF的流行；2007年，格鲁吉亚首次发生了ASF，随后向西北方向流行，再 次进入欧洲大陆。到目前为止，ASF己在非洲、美洲、欧洲及欧亚大陆交界处等许多国 家流行，2018年8月3日，中国确诊首例非洲猪瘟疫情，2018年之前，中国没有非洲 猪瘟。分子流行病学研究表明：传入中国的非洲猪瘟病毒属基因Ⅱ型，与格鲁吉亚、俄 罗斯、波兰公布的毒株全基因组序列同源性为99.95％左右，通常非洲猪瘟跨国境传入 的途径主要有四类：一是生猪及其产品国际贸易和走私，二是国际旅客携带的猪肉及其 产品，三是国际运输工具上的餐厨剩余物，四是野猪迁徙。中国已查明疫源的68起家 猪疫情，传播途径主要有三种：一是生猪及其产品跨区域调运，占全部疫情约19％；二 是餐厨剩余物喂猪，占全部疫情约34％；三是人员与车辆带毒传播，这是当前疫情扩散 的最主要方式，占全部疫情约46％。