[发明专利]离心过滤结合荧光染色判定液体菌种细菌污染情况的方法

权利要求书

1.一种离心过滤结合荧光染色快速判定食用菌液体菌种细菌污染情况的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）培养取样：于液体菌种培养过程中或培养结束后取培养液作为样品；

2）离心过滤：无菌条件下将取到的样品用40目无菌铁纱布过滤去除菌丝体，再将过滤液采用离心过滤管进行进一步离心过滤，以使污染细菌富集到亲水性的过滤膜上；每份样品平行制备两份富集细菌的过滤膜；

3）CTC染色检测：在其中一份过滤膜上滴入20-50 μL、1 mmol/L的5-氰基-2,3-二(4-甲基苯基)四唑氯化物染液，于37℃下染色60 min，然后采用肉眼进行初步观测，若显红色或浅黄色则表示液体菌种发生细菌污染；

4）CFDA染色检测：对于CTC染色后不显色的样品，将相应平行制备的过滤膜转至营养琼脂平板中，35℃培养8-12 h，再在膜上滴入20-50 μL、200 μg/mL的5(6)-羧基二乙酸荧光素染液，492 nm LED灯下观察，从而对液体菌种细菌污染情况进行进一步判定。

2.根据权利要求1所述的离心过滤结合荧光染色快速判定食用菌液体菌种细菌污染情况的方法，其特征在于：步骤2）离心过滤时，过滤液的体积应不低于离心过滤管容量的1/5。

3. 根据权利要求1所述的离心过滤结合荧光染色快速判定食用菌液体菌种细菌污染情况的方法，其特征在于：步骤2）中所用离心过滤管中过滤膜的孔径为0.22 μm。

4. 根据权利要求1所述的离心过滤结合荧光染色快速判定食用菌液体菌种细菌污染情况的方法，其特征在于：步骤2）中所述离心的转速为8000-10000 rpm，时间为5-10 min。