[发明专利]一种从桑白皮中提取高含量脱氧野尻霉素的方法

权利要求书

1.一种从桑白皮中提取脱氧野尻霉素的方法，其特征在于，

包括如下具体步骤：

（1）对桑白皮原料的前处理：将桑白皮原料用绞碎机绞碎，碎粒过筛；

（2）酶解提取：将桑白皮原料颗粒加入提取设备中，加入一定量的水，加入纤维素酶进行酶解提取，控制酶解的最适pH与温度；提取一定时间后过滤，继续加入一定量水和纤维素酶，控制酶解提取最适pH与温度，再提取一定时间后过滤，合并两次提取液；

（3）乙醇提取：向上一步酶解提取后的原料中加入一定量一定浓度的乙醇溶液，控制提取温度，提取一定时间后过滤，继续加入一定量一定浓度的乙醇溶液，以相同的条件提取一定时间，之后过滤；

（4）多糖成分的去除：将酶解提取液与乙醇提取液合并，加入一定量的高浓度乙醇溶液调节合并液乙醇浓度到一定范围，静置一段时间后过滤；

（5）黄酮成分的去除：将上一步得到的过滤后乙醇溶液浓缩，浓缩至原体积的十分之一后静置，离心；

（6）阳离子树脂柱纯化：将上一步得到的滤液以一定量的水稀释，按照一定流速上入阳离子树脂柱中，上柱完毕后先用一定量水溶液以一定流速洗脱，再用氨水以一定流速洗脱，氨水洗脱液浓缩至原体积的五分之一；

（7）正丁醇萃取：将上一步得到的浓缩液以水饱和正丁醇萃取数次，浓缩干燥正丁醇溶液至粉末态后，加水重新溶解；

（8）聚酰胺树脂柱纯化：将上一步得到的溶液以一定流速上入聚酰胺树脂柱上，通过选用不同浓度的乙醇溶液进行洗脱，收集高浓度的乙醇洗脱部分，浓缩至原体积的十分之一，静置析晶，结晶过滤；

（9）重结晶提纯：将上一步得到的结晶加入一定量的水中，加热使之全部溶解，保持该温度一定时间后，冷却静置，使结晶析出，过滤干燥结晶，得到含量98%以上的脱氧野尻霉素产品；

所述步骤（1）原料前处理条件包括：选取干燥的无霉变的桑白皮原料，使用绞碎机绞碎，绞碎的原料要求能通过10目筛网；

所述步骤（2）中：第一次酶解提取加入的水的量为8-10BV；加入的纤维素酶的活性为10万单位/g，所述纤维素酶加入的量为桑白皮原料量的1%-1.5%，控制的温度为55℃-65℃，所述的pH控制在5.5-6.5间，酶解提取2-3小时；第二次加入的水量为6-8BV,酶解提取时间控制在1-2小时，其余条件同第一次酶解；

所述步骤（3）中：第一次乙醇提取加入的乙醇溶液浓度在70-75%，加入的倍量为12-15BV，控制提取温度在65-70℃，提取2-3小时；第二次提取加入的乙醇的倍量为10-12BV，提取时间1-2小时，其余条件同第一次乙醇提取；

所述步骤（4）中：加入的乙醇溶液的浓度为95%以上乙醇溶液，所述调节合并液乙醇浓度的范围为60-65%；所述静置时间为3-6小时，静置之后过滤，不溶性成分即为桑白皮多糖成分；

所述步骤（5）中：所述浓缩条件为65℃-75℃，压强-0.06MPa至-0.08MPa；

所述步骤（6）中：加入的水量为上一步浓缩得到溶液体积的2-4倍，上柱速度为1-1.5BV/h；所述的水溶液的量为柱体积的1-2BV，洗脱速度为1BV/h；所述的氨水的浓度为5%，所述氨水洗脱量为5-8BV，洗脱速度为1.5-2BV/h；所述浓缩条件为70℃-75℃，压强-0.06MPa至-0.08MPa；

所述步骤（7）中：正丁醇萃取液的加入量为上一步得到的浓缩液体积的3-5BV,第一次萃取使用2-3BV正丁醇萃取，第二次萃取使用1-2BV的正丁醇萃取，每次萃取时间为30min；所述浓缩条件为75℃-80℃，压强-0.06MPa至-0.08MPa；浓缩至浓缩液原体积的1%时，转入真空干燥中，所述真空干燥的条件为75℃-80℃，压强-0.06MPa至-0.08MPa；加入水的量为得到的粉末重量的10-15BV；

所述步骤（8）中：上柱流速为1-1.5BV/h；低浓度乙醇浓度为25-35%，加入的量为3-5BV，高浓度乙醇的浓度为65-75%，加入的量为5-7BV，所述浓缩条件为65℃-75℃，压强-0.06MPa至-0.08MPa；所述的静置析晶时间为3-6小时；

所述步骤（9）中：加入的水量为结晶的量的2-3BV，加热的温度为55-65℃，加热时间为30min；静置冷却时间为3-6小时。