[发明专利]一种杜氏盐藻培养基及其制备方法和培养方法

说明书

本发明涉及海洋微藻技术领域，特别涉及一种杜氏盐藻培养基及其制备方法和培养方法。该培养基包括前期一级培养基和后期二级培养基；前期一级培养基的组成为：硝酸钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、碳酸氢钠、铁盐母液、微量元素母液、氯化钠；后期二级培养基的组成为：硝酸钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、铁盐母液、微量元素母液、氯化钠。本发明通过前期低盐，充足营养物质和适当的光照使杜氏盐藻快速生长，后期高盐度，低营养盐和强光照为杜氏盐藻提供不利环境，迫使杜氏盐藻积累胡萝卜素，该方法既有利于盐藻生长，又不影响胡萝卜素积累。

技术领域

本发明涉及海洋微藻技术领域，特别涉及一种杜氏盐藻培养基及其制备方法和培养方法。

背景技术

杜氏盐藻(学名Dunaliella salina)是一种嗜盐的绿色微藻，属绿藻纲团藻目，可以生活在0.5-5.0MNaCl的盐浓度环境中，由于其不具有细胞壁，且细胞膜富有弹性使其能够适应各种极端环境。在高盐度、高光强度、温度胁迫、缺氮等非生物胁迫因素下杜氏盐藻的β-胡萝卜素含量上升，其中高光和高盐胁迫下效果最为显著。有研究报道，其β-胡萝卜素的含量可高达干重的14％，环境胁迫下每个藻细胞含有约5-10倍的β-胡萝卜素。光学显微镜下可见β-胡萝卜的特征吸收光谱使盐藻细胞呈现鲜红色。

胡萝卜素由于其分子中含有多个双键的化学结构特点以及极低的极性，使其自身具有抗氧化性主要表现在它能够淬灭多达1000个自由基，也就是有清除自由基的能力。由于其抗氧化性，可以降低机体衰老以及预防疾病的发生，如肾脏病、癌症、动脉粥样化硬化和高血压等。同时，β-胡萝卜素还具有增强免疫力等功能。因此β-胡萝卜素被广泛应用于保健品、药品等有关人体健康的行业，同样也作为药物和着色剂广泛应用于食品和化妆品行业。

目前盐藻生产胡萝卜素效率低，只能依靠室外太阳光照，自养为主，易受外部环境影响，并且容易滋生杂菌，盐藻产出量不高。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种杜氏盐藻培养基及其制备方法和培养方法。该发明解决了盐藻生长缓慢和胡萝卜素积累低的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种杜氏盐藻培养基，包括前期一级培养基和后期二级培养基；

前期一级培养基的组成为：硝酸钠0.1～2.0g/L、磷酸二氢钾0.01～0.10g/L、葡萄糖0.1～2.0g/L、碳酸氢钠0.05～0.50g/L、铁盐母液0.1～2.0ml/L、微量元素母液1.0～5.0ml/L、氯化钠10～100g/L、水补足至1L；

后期二级培养基的组成为：硝酸钠0.1～1.0g/L、磷酸二氢钾0.01～0.10g/L、碳酸氢钠0.1～2.0g/L、铁盐母液0.1～1.0ml/L、微量元素母液0.1～2.0ml/L、氯化钠100～200g/L、水补足至1L；

铁盐母液的组成为：乙二胺四乙酸二钠1.0～5.0g、氯化铁0.1～1.0g、水补足至1L；

微量元素母液的组成为：硼酸0.1～1.0g、硫酸铜10～100mg、硫酸锌50～150mg、二氯化钴10～100mg、氯化锰10～100mg、钼酸铵0.1～1.0g、水补足至1L。

作为优选，前期一级培养基的组成为：硝酸钠0.5～1.0g/L、磷酸二氢钾0.02～0.06g/L、葡萄糖0.5～1.5g/L、碳酸氢钠0.10～0.20g/L、铁盐母液0.8～1.2ml/L、微量元素母液1.0～2.0ml/L、氯化钠50～70g/L、水补足至1L；

后期二级培养基的组成为：硝酸钠0.1～0.5g/L、磷酸二氢钾0.01～0.05g/L、碳酸氢钠0.5～1.5g/L、铁盐母液0.3～0.7ml/L、微量元素母液0.5～1.5ml/L、氯化钠140～180g/L、水补足至1L；