[发明专利]一种鉴定血痕遗留时间的方法

说明书

本发明提供了一种鉴定血痕遗留时间的方法，通过检测血迹中hsa‑miR106b‑5p、hsa‑miR155‑5p、hsa‑miR16‑5p、hsa‑miR140‑5p、hsa‑miR423‑3p、hsa‑miR423‑5p、hsa‑miR93‑5p、hsa‑miR222‑3p、hsa‑miR483‑3p、hsa‑miR139‑5p、hsa‑miR142‑5P、hsa‑miR191‑5p的相对表达量推测血痕遗留时间。本发明提供的鉴定方法对血迹样本的检测受环境影响较小；无需传统方法的降解处理，检测时间短，结果误差更小；利用24h节律变化的microRNA，使用机器学习的方法构建预测模型，相比其他方法可以更加精确地推断血痕的离体时间。

技术领域

本发明属于法医学检测领域，具体涉及一种推断血痕遗留时间的方法。

背景技术

血痕是一种在案发现场比较常见的生物性检材，血痕对于案发时间、案发性质的推测和案件重塑等方面均具有重大作用。目前对于血痕遗留时间的推测主要利用RNA或DNA在体外的降解时间来进行反向推测。

中国专利202010517271.X中公开了一种通过检测RNA降解程度判断法医学中血痕形成时间的方法。选择18S rRNA为基础，分别以44bp的短片段，149bp的中片段以及305bp长片段为靶序列设计引物。运用短中长这三种引物，进行实时荧光定量PCR(qPCR)检测。对梯度稀释的标准品进行qPCR反应，构建标准曲线。通过qPCR扩增检测得到Ct值，代入标准曲线可以对起始模版拷贝数进行定量。随着时间的增加，长片段目的序列扩增成功的概率最低，中片段次之，短片段相对稳定扩增成功概率较高。通过计算长片段与短片段起始拷贝数的比值以及中片段与短片段起始拷贝数的比值，判断人血痕样本中RNA的完整度。通过分析RNA完整度与时间的线性关系，从而为研究血痕存留时间、死亡时间以及损伤时间等提供技术手段。

但利用RNA或DNA在体外的降解时间来进行反向推测，结果的精确度仅能达到“天”的水平，在一定程度上增加了案件难度。

在几乎所有生物体中都存在24h明暗循环的生理性节律。而这一生理性周期主要是由于在外界的长期影响下，体内产生的一系列节律性变化所形成的。在不同器官和组织中不同的基因以昼夜节律和特定方式进行着变化，并且在很大程度上受动态表观遗传和转录后机制调控。microRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，主要参与转录后基因表达调控。因此microRNA在不同时间的表达可能与基因的节律性表达具有一定的相关性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明主要利用microRNA在24h表达节律性，更为细化地推断血痕的遗留时间。本发明主要目的是推断24h内血痕遗留在现场的时间。

一方面，本发明提供了一种鉴定血痕遗留时间的microRNA组合。

所述的microRNA组合包括：hsa-miR106b-5p、hsa-miR155-5p、hsa-miR16-5p、hsa-miR140-5p、hsa-miR423-3p、hsa-miR423-5p、hsa-miR93-5p、hsa-miR222-3p、hsa-miR483-3p、hsa-miR139-5p、hsa-miR142-5P。

所述的microRNA组合中还包括内参基因hsa-miR191-5p。

另一方面，本发明提供了一种鉴定血痕遗留时间的方法。

通过检测前述的microRNA组合中各个microRNA的相对表达量推测血痕遗留时间进行鉴定。

所述的方法包括通过SYBRGreen荧光实时定量PCR技术检测目标分子在样本中的相对表达量。

所述的相对表达量使用2^-△△CT法进行计算。