[发明专利]核酸-抗体双重癌症检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种核酸‑抗体双重癌症检测试剂盒。本发明通过对CXCL1基因序列进行分析获得了特异性针对CXCL1检测的RPA引物和探针；同时针对CXCL1蛋白筛选并获得效果较好的单克隆抗体，将所述单克隆抗体用于制备免疫检测试剂盒。将两个检测方法进行组合使用，能够进一步提高检测的准确性，并且成本低廉，适于大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体的涉及一种核酸-抗体双重癌症检测试剂盒。

背景技术

在全世界，膀胱癌是泌尿系统中发病率最高的恶性肿瘤，尿路上皮癌是最常见的病理类型。在男性恶性肿瘤，膀胱癌发病率居第4位，死亡率居第9位，男女发病率比例为3:1。每年新确诊膀胱肿瘤患者超过33万例，超过13万人死于膀胱癌。超过2/3的患者确诊时为非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌，但术后极易复发且10%～30%的复发患者会进展为肌层浸润性膀胱尿路上皮癌，其中约30%的患者确诊时已发生远处器官转移。所以建立快速、准确的检测膀胱癌的方法，对于膀胱癌患者的临床诊断和及时有效的治疗具有重大的意义。

CXCL1（Chemokine (C-X-C motif) ligand 1），即趋化因子CXC基序配体1，是属于CXC趋化因子家族的细胞因子，其先前也称GRO1（Human growth-regulated oncogene 1，生长调节致癌基因1），KC（Keratinocyte chemoattractant，角化细胞趋化物），NAP-3（Neutrophil-activating protein 3，嗜中性粒细胞活化蛋白3）和MSGA-α（Melanomagrowth stimulating activity alpha，黑素瘤生长刺激素α）。 在人类中，该蛋白由cxcl1基因编码，位于人类4号染色体。CXCL1 在巨噬细胞、中性粒细胞和上皮细胞中表达，并呈现中性粒细胞趋化活性，CXCR2 是CXCL的趋化因子受体，与CXCL1结合后表现出趋化作用。研究表明，CXCL1是在膀胱癌中高表达，并且在分化差、临床分期晚、有复发的病例中，其表达程度明显高于分化好、临床分期早、无复发的病例，因此CXCL1可作为尿路上皮细胞肿瘤标志物，用于膀胱癌的的诊断与提前干预、治疗。 “W02007026895”公开了以CXCL1 蛋白质作为肿瘤标记物，用于检测尿路上皮癌的用途，W02010/050554公开了CXCL1抗体及其检测试剂盒，但对新的CXCL1检测试剂盒仍然存在很大的需求。因此，开发一种制备简单、成本低廉、使用方便、不需要高精尖仪器的检测方法是目前研究的一个重要方面。

发明内容

基于上述发现，本发明的首要目的在于提供一种新的膀胱癌检测试剂盒。本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种制备简单、成本低廉、使用方便、不需要高精尖仪器的检测试剂盒。所述试剂盒通过核酸-抗体双重检测方法对膀胱癌患者进行检测，进一步提高检测的准确性。

本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种针对CXCL1的核酸检测试剂，所述核酸检测试剂包含检测引物对和探针，所述上游引物序列如SEQ ID NO :2所示，所述下游引物序列如SEQ ID NO :3所示，所述探针的序列如SEQ ID NO :4所示。

在一些实施例中，本发明的探针在探针中间距5’端36bp的位置处采用dSpacer修饰，dSpacer分子两侧的距5’端34bp和39bp位置的胸腺嘧啶(dT)分别被荧光基团FAM和淬灭基团BHQ1取代，并且在探针的3’末端通过阻塞基团C3Spacer修饰。

一种特异性结合CXCL1的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，重链CDR1区、CDR2区和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQID NO:7、8和9所示；该轻链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中轻链CDR1区、CDR2区和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、11和12所示。