[发明专利]一种特异性识别T-2毒素的适配体亲和柱及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种特异性识别T-2毒素的适配体，其特征在于，所述适配体的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种权利要求1所述的适配体组装的适配体亲和柱，其特征在于，所述适配体亲和柱包含载体和T-2毒素适配体，所述载体为链霉亲和素琼脂糖凝胶，所述T-2毒素适配体通过化学键偶联在载体上。

3.一种权利要求3所述适配体亲和柱的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将链霉亲和素琼脂糖凝胶用结合缓冲液洗涤活化；

(2)取步骤(1)活化的链霉亲和素琼脂糖凝胶1mL，加入适配体溶液，孵育即得偶联产物；

(3)用结合缓冲液洗涤步骤(2)制备的偶联产物，加入2％的牛血清白蛋白溶液反应封闭剩余活性基团，得到链霉亲和素琼脂糖凝胶与适配体的偶联胶体；

(4)将步骤(3)所得的偶联胶体洗涤后，用结合缓冲溶液重悬，装柱，于4℃保存备用。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述链霉亲和素琼脂糖凝胶的质量浓度为1mg/mL，所述链霉亲和素琼脂糖凝胶为1mL；所述结合缓冲液洗涤的方法为：每次2mL，重复洗涤3～8次。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)、(3)、(4)中，所述结合缓冲液为20mM NaH₂PO₄与150mM NaCl配成的pH 7.4的缓冲液。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述适配体溶液的摩尔浓度为2μM，适配体溶液体积为2mL；所述孵育方法为25℃下孵育器孵育10min。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述洗涤是使用结合缓冲液反复洗涤3～8次，每次2mL；所述反应的时间为12h。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述洗涤为分别使用结合缓冲液和甘氨酸-盐酸缓冲液先后交替洗涤3～8次，以除去未偶联的适配体及多余的牛血清白蛋白；所述结合缓冲液与甘氨酸-盐酸缓冲液的体积比为1：1；所述甘氨酸-盐酸缓冲液的摩尔浓度为100mM，pH为3.0。

9.一种权利要求2所述适配体亲和柱的应用，其特征在于，所述适配体亲和柱可用于富集和纯化待测物中的T-2毒素。

10.一种权利要求9所述适配体亲和柱的应用，其特征在于，所述待测物为粮食、坚果、饲料、乳及乳制品、水产、中药、体液、水中一种或多种。