[发明专利]一种快速发展澳洲野生稻特异性分子标记的方法

权利要求书

1.一种澳洲野生稻特异性分子标记引物，其特征在于，所述引物序列如下：

正向引物序列：5’-CTCCTCTTCCACGACTGCTT-3’；

反向引物序列：5’-GGTTCATCTCGCTCTTCTCC-3’。

2.根据权利要求1所述澳洲野生稻特异性分子标记引物的制备方法，其特征在于，将澳洲野生稻的BAC末端序列与另一已经全基因组测序水稻品种进行序列比对并设计引物，在缺失或插入的序列两端设计引物。

3.根据权利要求2所述澳洲野生稻特异性分子标记引物的制备方法，其特征在于，所述已经全基因组测序水稻品种为日本晴。

4.根据权利要求2所述澳洲野生稻特异性分子标记引物的制备方法，其特征在于，提取待检测水稻叶片的总DNA，并以此DNA为模板，利用所设计分子标记对样品进行PCR扩增；PCR反应结束后，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳来验证分子标记的可利用性。

5.根据权利要求4所述澳洲野生稻特异性分子标记引物的制备方法，其特征在于，采用CTAB法提取待测种质的幼嫩叶片DNA，所提取的DNA溶解于双蒸水中，4℃保存备用。

6.根据权利要求4所述澳洲野生稻特异性分子标记引物的制备方法，其特征在于，PCR反应体系为：反应体积为20μL，其中包括：2×Taq Mix buffer 10μL，双蒸水6μL，10μm的引物E5-4 2μL，待测样品DNA 2Ml；PCR反应条件为：95℃4分钟；95℃30秒，55℃30秒，72℃30秒，35个循环；72℃10分钟。

7.根据权利要求4所述澳洲野生稻特异性分子标记引物的制备方法，其特征在于，PCR产物在琼脂糖凝胶电泳上检测，用1×TAE作为电泳缓冲液，电泳恒定电压为120V；电泳30min后，在凝胶成像系统下观察并拍摄。

8.一种鉴别澳洲野生稻的方法，其特征在于，通过权利要求1所述引物扩增水稻DNA，并根据扩增结果判断鉴定结果。

9.根据权利要求8所述的鉴别澳洲野生稻的方法，其特征在于，在168bp处出现特异性扩增条带的品种为澳洲野生稻。

10.权利要求1所述的澳洲野生稻特异性分子标记引物在鉴定水稻中的应用。