[发明专利]重组微生物及其用于生产1,5-戊二胺的方法

权利要求书

1.一种生产1,5-戊二胺的重组微生物，其包括至少两个基因，且所述至少两个基因的其中至少一者位于表达载体上，其中，所述至少两个基因包括编码赖氨酸脱羧酶的基因以及编码生成磷酸吡哆醛的酶的基因。

2.根据权利要求1所述的重组微生物，其特征在于，所述表达载体包括编码赖氨酸脱羧酶、编码生成磷酸吡哆醛的酶或其组合的核苷酸序列以及控制所述核苷酸序列的表达的持续型启动子序列。

3.根据权利要求2所述的重组微生物，其特征在于，所述编码赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列为具有与SEQ ID NO：11至少有80％序列一致性且与SEQ ID NO：11具有相同活性的序列。

4.根据权利要求1所述的重组微生物，其特征在于，所述编码生成磷酸吡哆醛的酶的基因的核苷酸序列为表达PdxH、PdxY、PdxK或其任意组合的核苷酸序列。

5.根据权利要求4所述的重组微生物，其特征在于：

所述编码表达PdxH的核苷酸序列具有与SEQ ID NO：1至少有80％序列一致性且与SEQID NO：1具有相同活性的序列；

所述编码表达PdxY的核苷酸序列具有与SEQ ID NO：3至少有80％序列一致性且与SEQID NO：3具有相同活性的序列；或

所述编码表达PdxK的核苷酸序列具有与SEQ ID NO：5至少有80％序列一致性且与SEQID NO：5具有相同活性的序列。

6.根据权利要求2所述的重组微生物，其特征在于，所述持续型启动子为J系列持续型启动子中的其中一者或PlacI持续型启动子。

7.根据权利要求6所述的重组微生物，其特征在于，所述J系列持续型启动子为J23100、J23101、J23102、J23103、J23104、J23105、J23106、J23107、J23108、J23109、J23110、J23111、J23112、J23113、J23114、J23115、J23116、J23117、J23118或J23119。

8.根据权利要求1所述的重组微生物，其属于大肠杆菌属、克雷伯菌属、欧文氏菌属、沙雷氏菌属、普罗威登斯菌属、棒状杆菌属或短杆菌属。

9.根据权利要求8所述的重组微生物，其为经过重组的大肠杆菌K-12W3110菌株或BL21菌株。

10.根据权利要求9所述的重组微生物，其以寄存编号DSM 33754寄存于德国微生物保藏中心。

11.一种生产1,5-戊二胺的方法，包括：

将根据权利要求1至10中任一项所述的重组微生物与赖氨酸在第一溶液中混合，以将所述赖氨酸转化为1,5-戊二胺；以及

自所述第一溶液中分离得到1,5-戊二胺。

12.根据权利要求11所述的方法，进一步包括于所述第一溶液中添加辅助因子。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述辅助因子为磷酸吡哆醛、吡哆醛、吡哆醇或其任意组合。

14.根据权利要求11所述的方法，进一步包括：

在分离得到1,5-戊二胺后，回收溶液中的微生物；

将回收的所述微生物加入包含赖氨酸的第二溶液中；

于所述第二溶液中加入根据权利要求1至10中任一项所述的重组微生物；以及

自所述第二溶液中分离得到1,5-戊二胺。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述微生物加入所述第二溶液中的量以OD₆₀₀值计为1至10。