[发明专利]黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒及应用

权利要求书

1.黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒，其特征在于：包括孔底包被有黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板、黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的多克隆抗体、起标准物质作用的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01纯品溶液、察氏培养基或其他适宜产毒黄曲霉菌生长的培养基、与黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体、ELISA显色液与终止液、样品稀释液；

所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子是指AFT-YJFZ01肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1 所示。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒，其特征在于：所述的孔底包被有黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板，是通过如下方法制备获得：将上述AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体溶解在ELISA包被缓冲液中，形成0.2-8.0 μg/mL的包被液，再加入至酶标板中，4 ℃放置过夜或者37 ℃放置不少于2 h后，去除上述酶标板中包被液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；然后加入ELISA常规封闭液，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，再弃去封闭液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板。

3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒，其特征在于：黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的多克隆抗体为黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01兔源多克隆抗体，所述的辣根过氧化物酶标记抗体为辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体。

4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒，其特征在于：所述的ELISA显色液是指ELISA常规的双氧水与TMB显色液；

所述的终止液是指ELISA常规的显色终止液：2mol/L硫酸水溶液。

5.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒，其特征在于：所述的样品稀释液是指含有0.1%山梨醇和0.1%糖的0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液。

6.权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子免疫快速检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

用试剂盒中的察氏培养基适宜产毒黄曲霉菌生长的培养基培养并制备待鉴别菌株或待鉴别样品的待测液；

将待鉴别菌株或待鉴别样品的待测液用样品稀释液稀释，将稀释后待鉴别菌株的待测液或待鉴别样品的待测液，以每孔100-200 μL加入到试剂盒中的酶标板孔中，放置室温或37 ℃反应不少于1 h后，弃去反应后液体，洗涤酶标板;

然后加入试剂盒中AFT-YJFZ01多克隆抗体，每孔加入100-200μL，放置室温或37 ℃反应不少于1 h后，弃去液体，再洗涤酶标板；

然后每孔加入试剂盒中的辣根过氧化物酶标记抗体100-200μL，放置室温或37 ℃反应不少于1 h后，弃去液体，再洗涤酶标板，

然后先后加入试剂盒中的ELISA显色液、终止液，最后通过酶标仪读取并计算待测样品中AFT-YJFZ01的浓度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，用系列浓度的起标准物质作用的黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01纯品溶液，替换待测液，用于制作标准曲线，计算得到待测样品中AFT-YJFZ01的浓度。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括：检测结果评判：根据酶标仪结果，获得单位体积黄曲霉待测液中黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的含量，分析待鉴别菌株的黄曲霉毒素产毒力，待鉴别菌株中黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01浓度越高，则说明鉴别菌株产黄曲霉毒素能力即产毒力越强；

根据酶标仪结果，获得单位体积待鉴别样品液中黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT-YJFZ01的含量，判定待鉴别样品中是否含有黄曲霉毒素的强产毒力菌株。