[发明专利]一种分离并纯化重组TPH2蛋白的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，

获取含重组TPH2蛋白的溶液，所述重组TPH2蛋白中包括TPH2、链霉亲和素和Flag标签；

亲和层析：分别采用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行亲和层析，获取层析液；

采用分子筛对层析液进行层析纯化即可获得TPH2。

2.根据权利要求1所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述获取含重组TPH2蛋白的溶液的过程为：

获得含TPH2-2Streptavidin-3Flag基因片段的重组质粒，将重组质粒转染到293F表达细胞进行重组蛋白表达后，进行细胞破碎处理获得细胞破碎液，该细胞破碎液即为含重组TPH2蛋白的溶液；

优选的，所述细胞破碎处理时采用机械破碎法、反复冻融法或超声波处理法进行细胞破碎，破碎过程中所用的缓冲液为平衡缓冲液；或/和，在使用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠之前，先采用平衡缓冲液对Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行保存；

所述平衡缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO₄，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。

3.根据权利要求2所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，在进行Flag磁珠和链霉亲和素磁珠保存之前，先使用超纯水和0.1mol/L的NaOH溶液对其进行清洗；

在采用Flag磁珠进行吸附之前，先采用重生缓冲液和平衡缓冲液分别洗脱Flag磁珠至少一次；

其中，重生缓冲液包括含0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至2.0-3.5。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，采用Flag磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到Flag磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次flag小肽溶液对该Flag磁珠进行洗脱即可；

采用链霉亲和素磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到链霉亲和素磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次生物素溶液对该链霉亲和素磁珠进行洗脱即可。

5.根据权利要求4所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述洗杂缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，1～10mmol/L的ATP，1～10mmol/L的MgCl₂，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；

所述flag小肽溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO₄，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，0.1～0.5mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；

所述生物素溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO₄，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，1～50mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述分子筛对层析液进行层析纯化时，分子筛的流动相缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。