[发明专利]一种简单高效的薄壳山核桃农杆菌转化体系的构建及优化

权利要求书

1.一种薄壳山核桃的转基因根系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤(1) 、准备苗龄为子叶期的薄壳山核桃幼苗；

步骤(2) 、制备携带35S::GFP的发根农杆菌K599；

步骤(3) 、发根农杆菌活化：

将发根农杆菌K599在TY固体培养基上划线培养，获得单菌落，挑取单菌落于TY液体培养基进行培养，得到OD₆₀₀=0.8时活化后的发根农杆菌溶液；

步骤(4)、发根农杆菌侵染薄壳山核桃幼苗接近种子部分的胚轴或者茎部；其中薄壳山核桃幼苗接近种子部分的胚轴或者茎部位置为距幼苗根部的胚轴或茎3～5 cm处；

步骤(5)、共培养；

步骤(6) 、生根培养，待胚轴或茎部侵染处生长出薄壳山核桃的转基因毛状根。

2.根据权利要求1所述的一种薄壳山核桃的转基因根系的构建方法，其特征在于所述侵染发根农杆菌的方法是对薄壳山核桃幼苗接近种子部分的胚轴或者茎部进行伤口切割；然后将幼苗置于重悬后的菌液中浸泡20-30 min，期间轻轻摇晃，使伤口和发根农杆菌充分接触，最后取出幼苗将多余菌液吸干。

3.根据权利要求2所述的一种薄壳山核桃的转基因根系的构建方法，其特征在于所述对薄壳山核桃幼苗接近种子部分的胚轴或者茎部进行伤口切割方法包括但不限于环割，或单面刀片横向切割。

4.根据权利要求1所述的一种薄壳山核桃的转基因根系的构建方法，其特征在于所述侵染发根农杆菌的方法是用注射器注射活化后的发根农杆菌菌液至待转化幼苗的胚轴或茎。

5.根据权利要求1所述的一种薄壳山核桃的转基因根系的构建方法，其特征在于共培养的条件是避光，温度24-28℃，湿度80%-90%。

6.根据权利要求1所述的一种薄壳山核桃的转基因根系的构建方法，其特征在于生根培养的条件是温度21-24℃，湿度60%-70%。

7.一种发根农杆菌介导幼苗获得转基因植物，通过权利要求1-6任一所述的方法构建而成。